2022年PBS缓冲液配制方法.docx

PBS缓冲液配方不管是免疫组化，仍是细胞培育中，常用到PBS 缓冲液，下面是我们试验室的配方，供大家参考；我们试验室的配方：A 液： 0.1mol/L 磷酸二氢钾：磷酸二氢钾（ KH2PO4， MW136.09）1.361g，加双蒸水至 100ml；B 液： 0.1mol/L 磷酸氢二钠：酸酸氢二钠（ Na2HPO4.2H2O， MW177.99 ） 1.78g，加双蒸水至100ml；或者酸酸氢二钠（ Na2HPO4.12H2O， MW358.14 ）3.58g，加双蒸水至 100ml；pH A 液 （ ml） B 液（ ml）5.60 9.50 0.255.91 9.00 1.006.24 8.00 2.006.47 7.00 3.006.64 6.00 4.006.81 5.00 5.006.98 4.00 6.007.17 3.00 7.007.38 2.00 8.007.73 1.00 9.008.04 0.50 9.50一般免疫组化用PBS 都只包含 Na2HPO4.12H2O（磷酸氢二钠） NaH2PO4.2H2O（磷酸二氢钠）Nacl 用于细胞培育的 PBS需含有氯化钾称取 8g NaCl 、0.2g KCl 、1.44g Na2HPO4 和 0.24g KH2PO4, 溶于800ml 蒸馏水中，用 HCl 调剂溶液的 pH 值至 7.4，最终加蒸馏水定容至 1L 即可 0.01MPBS缓冲液称取 NaCl 8g ， KCl 0.2g ， Na2HPO4.12H2O3.63g, KH2PO4 0.24g，溶于 900ml 双蒸水中，用盐酸调pH 值至 7.4，加水定容至 1L，常温储存备用；PBS 是最普遍不过的试验室缓冲液，但其配方各异；以下是我的总结：母液的配制： 0.2M Na2HPO4 ： 称取 71.6g Na2HPO4-12H2O， 溶于1000ml水0.2M NaH2PO4 ： 称 取 31.2g NaH2PO4-2H2O ， 溶 于 1000ml 水各 种 浓 度 PBpH=7.4 的 配 制 ：先 配 0.2M PB pH=7.4 ， 100ml ： 取 19ml 0.2mol/L的NaH2PO4，81ml 0.2mol/L的Na2HPO4,即 可 ；然后 只需将 0.2M PB pH=7.4 按相应比例适当稀释即可，如：0.1M PB（ PH=7.4）：取500ml 0.2M PB ，加水稀释至1000ml 即可；0.01M PB （ PH=7.4）：取可50ml 0.2M PB ，加水稀释至1000ml 即；0.02M PB （ PH=7.4）：取100ml 0.2 M PB，加水稀释至1000ml 即可；如 需 要 NaCL 的话 ， 加 入 NaCL 至 0.9% （ g/100ml ） 即 可；另 ： 其 它 各 种 另 PH值 的 0.2M PB （ 100ml 配 方：pH0.2M NaH2PO4（ ml）0.2M Na2HPO4（ ml）5.793.56.55.89285.990106.087.712.36.185156.281.518.56.377.522.56.473.526.56.568.531.56.662.537.56.756.543.56.851496.945557.038627.133677.228727.323777.419ml81ml7.516847.613877.710.50.57.88.591.57.97938.05.394.7磷酸盐缓冲液（ Phosphate Buffer, PB），磷酸氢二钠和磷酸二氢钠缓冲液配方磷酸盐缓冲液（ Phosphate Buffer, PB）试剂： NaH2PO4·2H2ONa2HPO4·12H2O配制方法：配制时，常先配制0.2mol/L 的 NaH2PO4 和 0.2mol/L 的Na2HPO4，两者按肯定比例混合即成0.2mol/L 的磷酸盐缓冲液（ PB），依据需要可配制不同浓度的PB 和 PBS；（ 1 ） 0.2mol/L的 Na2HPO4 ； 称 取 Na2HPO4.12H2O 31.2g 或NaH2PO·4 H2O 27.6g加重蒸水至 1000ml 溶解；（ 2 ） 0.2mol/L 的 Na2HPO4：称取 NaHPO4·. 12H2O 71.632g（或Na2HPO·4 7H2O 53.6g 或 Na2HPO4·2H2O 35.6g）加重蒸水至 1000ml溶解；（ 3）0.2mol/L pH7.4 的 PB 的配制：取 19ml 0.2mol/L 的 NaH2PO4和 81ml 0.2mol/L 的 Na2HPO·4 12H2O,充分混合即为 0.2mol/L 的 PB（ pH 约为 7.4 7.5）；如 pH 偏高或偏低，可通过转变二者的比例来加以调整，室温储存即可；0.2mol/L 磷酸盐缓冲液（ pH5.78.0）pH0.2mol/L NaH2PO4ml0.2mol/L Na2HPO4ml5.793.56.55.892.08.05.990.010.06.087.712.36.185.015.06.281.518.56.377.522.56.473.526.56.568.531.56.662.537.56.756.543.56.851.049.06.945.055.07.039.061.07.133.067.07.228.072.07.323.067.07.419.081.07.516.084.07.613.087.07.710.589.57.88.591.57.97.093.08.05.394.7关于磷酸缓冲溶液的学问，我在网上搜寻了好多帖子，但是仍是不能确定正确的答案；现在把他们链接过来，期望有高手们参加讨论，我会把最终的正确解答整理出来，供应应大家；PBS可以为三种溶液的英文缩写，分别是1.磷酸盐缓冲溶液（ phosphate buffered solution）、2.磷酸盐缓冲盐水（ phosphate buffered saline）及3.磷酸盐缓冲钠（ phosphate buffered sodium），其配制方法不同， pH 值不同，发挥的生物学作用亦不完全相同；如无特别说明，生物学上常用的PBS是中性磷酸盐缓冲溶液（ phosp hate buffered solution）；无钙镁离子磷酸缓冲盐水（ PBS）（ 0.15Mol/L PH 7.2 ） NaCl 8.0gKCl 0.2g Na2HPO4 1.15g（如为 Na2HPO·4 12H2O，就为 2.89g）KH2PO4 0.2g将上述试剂依次溶于 1 000ml 去离子水中，完全溶解后， 115高压灭菌 10min15min，存在 4冰箱中备用；此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培育物；我们用的都是其次种问题 1：磷酸盐缓冲盐水（ phosphate buffered sodium），为什么用第三种或第一种呢 :这么多年以来我都以为PBS就是磷酸盐缓冲溶液， 其他两种说法的英语名称常见到，不过我始终都以为他们是差不多的东西；不同的汉语翻译倒是第一次听说；我们公司用的 PBS有许多种，抗体组用的中和 PBS配方就比较简洁，没有 K+ 离子， 只起到缓冲 PH 的作用； Na2HPO4+ KH2PO4 按照不同比例混匀，可以得到不同PH 的缓冲液，用于不同目的，这个在分子生物学中用得许多； 用于活细胞或者细菌处理的，为了保持渗透压，会加入其他的溶液，最常见的就是NaCl 和 KCl 调剂离子浓度；以上是个人的懂得，欢迎批判；:问题 2：既然抗体组的 PB S是起到缓冲 PH 的作用，那加入 80G 的 NACL 作用是什么？需要平稳渗透压吗？仍有加入 K 离子的是不是由于细胞上 NA-K 泵的缘由啊，血清里面又没有细胞，何来NA-K 泵一说啊？我觉得之所以这么配，其实就是对血清中缓冲环境的一种模拟罢了，血清里面又没有细胞，何来 NA-K 泵一说啊？我没说血清撒； 我们用的又没加 K ，我是说加了 K 的的问题 3：不加 NACL 会怎么样啊？多省钱啊在中和磷酸盐缓冲液中， NaCl 的主要作用应当是保持肯定的离子浓度，以维护抗体的活性；在离子浓度过高或过低的情形下，蛋白质 都会变性，抗体当然不例外；ps:哺乳类需用生理盐水浓度是 0.9%；称取 0.9 克氯化钠，溶解在少量蒸馏水中，稀释到 100 毫升；鸟类需用的生理盐水浓度是 0.75%；称取 0.75 克氯化钠，溶解后用蒸馏水稀释到 100 毫升；两栖类需用的生理盐水浓度是 0.65%；称取 0.65 克氯化钠，溶解后用蒸馏水稀释到 100 毫升；/size/font