菌落总数的测定方法操作规程.doc

食品中菌落总数的测定方法操作规程一、适用范围本标准规定了食品中菌落总数（Aerobic plate count）的测定方法。 本标准适用于食品中菌落总数的测定，实验采样方案按照GB4789.1-2016。二、编写依据GB4789.2-2016食品安全国家标准 食品微生物学检验菌落总数的测定三、术语和定义菌落总数：食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。四、内容1.设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：1 .1恒温培养箱：36±1，30±11.2 冰箱：251.3 恒温水浴箱：46±11.4 天平：感量为0.1g1.5 均质器1.6 振荡器1.7 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头1.8 无菌锥形瓶：容量250 mL、500 mL1.9 无菌培养皿：直径90 mm1.10 pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸1.11 放大镜或/和菌落计数器2.培养基和试剂:2.1 平板计数琼脂培养基：同GB 4789.15项下制法。 2.2 磷酸盐缓冲液：同GB 4789.15项下制法。 2.3 无菌生理盐水：同GB 4789.15项下制法。 2.4 30%碳酸钠溶液。2.5 1mol/L HCl。3.样品的稀释3.1固体和半固体样品：称取25 g样品置盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min10000 r/min均质1 min2 min，或放入盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min2 min，制成1:10的样品匀液。3.2液体样品：以无菌吸管吸取25 mL样品置盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。3.3用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。3.4按4.3操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1 mL无菌吸管或吸头。3.5根据对样品污染状况的估计，选择2个3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1 mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1 mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。3.6及时将15 mL20 mL冷却至46 的平板计数琼脂培养基（可放置于46 ±1 恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。4.培养4.1待琼脂凝固后，将平板翻转，36 ±1 培养48 h±2 h。水产品30 ±1 培养72 h±3 h。4.2 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4 mL），凝固后翻转平板，按5.1条件进行培养。5.菌落计数5.1选取菌落数在30 CFU300 CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30 CFU的平板记录具体菌落数，大于300 CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。5.2其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。5.3当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。6.结果与报告6.1若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）样品中菌落总数结果。6.2若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式（1）计算：N=C/(n1+0.1n2)d.（1）式中：N样品中菌落数；C平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；n1第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；n2第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；6.3若所有稀释度的平板上菌落数均大于300 CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。6.4若所有稀释度的平板菌落数均小于30 CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。6.5若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。6.6若所有稀释度的平板菌落数均不在30 CFU300 CFU之间，其中一部分小于30 CFU或大于300CFU时，则以最接近30 CFU或300 CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。6.7 菌落总数的报告（1）菌落数小于100 CFU时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。（2）落数大于或等于100 CFU时，第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位数；也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。（3）若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。（4）若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。（5） 称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。7.记录信息 应严格按照“食品微生物菌落总数测定原始记录”的要求进行填写，包括检品编号、检品名称、批号、检验依据、判定依据、样品性状、抽样来源、抽样时间和试验时间等，以及培养基的批号、培养温度和时间、试验数据、试验结论和检验人员标识等，如无需填写，须划“/”去掉。8 报告格式 结果：称重取样以 CFU/g 为单位报告，体积取样以 CFU/mL 为单位报告。例如“2.5×104CFUg”或“2.5×104 CFU/mL”。