临床微生物：肠杆菌属和沙雷菌属课件.ppt

1肠杆菌属和沙雷菌属肠杆菌属和沙雷菌属n掌握：形态、培养、生化反应掌握：形态、培养、生化反应n熟悉：致病性熟悉：致病性3肠杆菌属肠杆菌属（Enterobacter)4分类：分类：14个种个种 产气肠杆菌产气肠杆菌(E.aerogenes) 阴沟肠杆菌阴沟肠杆菌(E.cloacae) 杰高维肠杆菌杰高维肠杆菌(E.gergoviac) 阪崎肠杆菌阪崎肠杆菌(E.sakazakii) 泰洛肠杆菌泰洛肠杆菌(E.taylorac) 生癌肠杆菌生癌肠杆菌(E.cancerogenus) 中间肠杆菌中间肠杆菌(E.intermedius) 阿氏肠杆菌阿氏肠杆菌(E.asburiac) 溶解肠杆菌溶解肠杆菌(E.dissolvens) 霍氏肠杆菌霍氏肠杆菌(E.hormaechei) 神户肠杆菌神户肠杆菌(E.kobei) 帕瑞勒肠杆菌帕瑞勒肠杆菌(E.pyrinus) 超压肠杆菌超压肠杆菌(E.nimipressualis)聚团肠杆菌（成团泛菌）聚团肠杆菌（成团泛菌）河生肠杆菌生物群河生肠杆菌生物群1 河生肠杆菌生物群河生肠杆菌生物群2河生肠杆菌河生肠杆菌(E.aminigenus)5肠杆菌属是肠道正常菌群的成员之一肠杆菌属是肠道正常菌群的成员之一 条件致病，条件致病，医院感染的重要病原菌医院感染的重要病原菌可引起泌尿道感染、呼吸道感染、伤口感染可引起泌尿道感染、呼吸道感染、伤口感染以及败血症等。以及败血症等。在临床在临床检出率最高的是阴沟肠杆菌检出率最高的是阴沟肠杆菌和产气肠杆菌和产气肠杆菌。临床意义临床意义某地临床标本分离的肠杆菌科细菌的分布某地临床标本分离的肠杆菌科细菌的分布黏质沙雷菌 临床意义临床意义 阪崎肠杆菌阪崎肠杆菌 易致新生儿脑膜炎、菌血症、坏死性肠炎等易致新生儿脑膜炎、菌血症、坏死性肠炎等 婴幼儿感染后病死率高达婴幼儿感染后病死率高达50%50% 婴儿配方奶粉中不得检出该菌婴儿配方奶粉中不得检出该菌78基本特性基本特性形态：形态：G-b,G-b,粗短杆菌粗短杆菌特殊结构：特殊结构：有周身鞭毛有周身鞭毛 无芽胞无芽胞 少数有荚膜少数有荚膜 阴沟肠杆菌形态阴沟肠杆菌形态形态结构形态结构9兼性厌氧兼性厌氧营养要求不高营养要求不高普通平板上形成大而普通平板上形成大而湿润的黏液性菌落。湿润的黏液性菌落。MacMac：乳糖发酵菌落：乳糖发酵菌落（红色）（红色）血平板上不溶血。血平板上不溶血。阴沟肠杆菌阴沟肠杆菌基本特性基本特性培养特性培养特性10阴沟肠杆菌血平板菌落11 苯丙氨酸脱氨酶苯丙氨酸脱氨酶 葡萄糖酸盐葡萄糖酸盐+ +基本特性基本特性生化特性生化特性葡萄糖葡萄糖F +硝酸盐还原硝酸盐还原+氧化酶阴性氧化酶阴性触酶阳性触酶阳性肠杆菌科肠杆菌科四大生化特性四大生化特性IMViC IMVC IMVC：- - + +- - + +（大多数）（大多数） KIAKIA：AA+-AA+-或或AA-AA-12 标标 本（痰、尿、血液等）本（痰、尿、血液等） 直接涂片：直接涂片： 分离培养：分离培养： 增菌培养增菌培养 涂片涂片 鉴别培养基鉴别培养基 肉汤肉汤 染色染色 (BA、MAC) 镜检镜检 可疑菌落可疑菌落 先定科先定科 鉴定鉴定 药物敏感性试验药物敏感性试验 (生化、补充试验生化、补充试验)实验室检查实验室检查检验程序检验程序13肠杆菌属种见鉴定表肠杆菌属种见鉴定表生化反应产气杰高维帕瑞勒聚团河生，生物群1生癌阪崎霍氏阴沟克沃尼中间神户阿氏河生，生物群2溶解超压赖氨酸脱羧酶+-山梨醇+-V-+VP试验+VV+-+七叶苷+V+-V+V+蜜二糖+VV+-+-+-+蔗糖+V+-+V+-+-精氨酸脱氢酶-+V+-+VV+-鸟氨酸脱羧酶+-V+-V+核糖醇+-V-鼠李糖+V+-+-甲基-D-葡萄糖苷+-V-+VV-+黄色素-V-+-V-14 与其它肠杆菌科细菌主要生化区别与其它肠杆菌科细菌主要生化区别 IMViCIMViC试验试验 大肠埃希菌为大肠埃希菌为+ + - -+ + - - 肠杆菌属和肺克为肠杆菌属和肺克为- - + +- - + + 动力和鸟氨酸脱羧酶试验动力和鸟氨酸脱羧酶试验 肺炎克雷伯菌为阴性肺炎克雷伯菌为阴性 肠杆菌属多数为阳性肠杆菌属多数为阳性 阪崎肠杆菌：阪崎肠杆菌：GB 4789.40-2010 食品安全国家标准食品安全国家标准阪崎肠杆菌阪崎肠杆菌 引起严重的新生儿脑膜炎、坏死性结肠炎和菌血症（类肠毒素物质、LPS） 婴儿配方奶粉婴儿配方奶粉是主要感染渠道 不耐高温，耐不耐高温，耐干燥干燥、渗透压、渗透压1516血平板形成黄色菌落，黄色菌落，菌落形态有2种：n 典型的光滑型菌落，极易被接种环移动；n 干燥或粘液样菌落，周边呈放射状，不易被接种环移动，似橡胶状有弹性。培养特点培养特点17光滑型菌落光滑型菌落干燥样菌落干燥样菌落1819 -甲基甲基-D葡萄糖苷酶（葡萄糖苷酶（+）阪崎肠杆菌显色培养基阪崎肠杆菌显色培养基DFI（1000ml） 蛋白胨 11g牛肉膏粉 5g 氯化钠 5g 柠檬酸铁铵 1g硫代硫酸钠 1g 胆盐 1.5g 5-溴-4-氯-3-吲哚-D 葡萄糖苷 0.1g 琼脂 15g最终pH 7.30.220提供氮源、维生素、氨基酸和碳源维持渗透压测硫化氢抑制G+菌底物黄绿色菌落黄绿色菌落2122DFI培养基：大肠埃希菌无色菌落，金葡培养基：大肠埃希菌无色菌落，金葡菌一般不生长。菌一般不生长。大肠埃希菌阪崎肠杆菌通过生化反应鉴定到种通过生化反应鉴定到种24 肠杆菌科细菌常产生肠杆菌科细菌常产生AmpCAmpC酶酶，尤以，尤以阴阴沟肠杆菌沟肠杆菌最为突出。最为突出。 产产AmpCAmpC酶细菌的治疗，首选酶细菌的治疗，首选4 4代头孢代头孢（头孢吡肟）和碳青霉烯类抗生素。（头孢吡肟）和碳青霉烯类抗生素。 耐药性耐药性25AmpC酶的特征 AmpC酶是在革兰阴性菌中发现的由染色体或质粒介导的水解头孢菌素和头霉素的型内酰胺酶。 产AmpC酶细菌对三代头孢菌素和头霉素耐药,对四代头孢菌素和碳青霉烯类敏感,且不被酶抑制剂克拉维酸等所抑制，但其酶活性可被氯唑西林和硼酸抑制。 26AmpC酶的检测方法 头孢西丁三维试验是检测AmpC酶的经典方法； 除此之外，还有以硼酸化合物为抑制剂检测肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的AmpC酶、AmpC Disk、头孢西丁琼脂基础法等。 27头孢西丁三维试验检测头孢西丁三维试验检测AmpCAmpC酶酶28ESBLsESBLs与与AmpCAmpC酶的比较酶的比较ESBLsAmpC产酶的细菌产酶的细菌被酶抑制剂抑制被酶抑制剂抑制三代头孢菌素三代头孢菌素四代头孢菌素四代头孢菌素头霉素头霉素碳青霉烯类碳青霉烯类大肠埃希氏菌、肺大肠埃希氏菌、肺炎雷伯菌克、变形炎雷伯菌克、变形能能耐药耐药多敏感，少数耐药多敏感，少数耐药敏感敏感敏感敏感多为阴沟肠杆菌多为阴沟肠杆菌不能不能耐药耐药敏感敏感耐药耐药敏感敏感沙雷菌属沙雷菌属SerratiaSerratiasreii 自然环境中（水、空气、土壤等）常自然环境中（水、空气、土壤等）常见的细菌。见的细菌。临床最常见的是临床最常见的是黏质沙雷菌（黏质沙雷菌（S.marcescens）分布：分布：临床意义临床意义 黏质沙雷菌、液化沙雷菌和深红沙雷菌都是已证实黏质沙雷菌、液化沙雷菌和深红沙雷菌都是已证实的的条件致病菌条件致病菌，其中，其中黏质沙雷菌黏质沙雷菌是医院感染（肺炎、尿是医院感染（肺炎、尿路感染、败血症等）的重要条件致病菌之一。路感染、败血症等）的重要条件致病菌之一。 该菌属细菌在使用三代头孢菌素等抗生素治疗时，该菌属细菌在使用三代头孢菌素等抗生素治疗时，可以被诱导产生持续高产的可以被诱导产生持续高产的AmpCAmpC酶酶，表现为对多种抗生，表现为对多种抗生素耐药，应引起重视。素耐药，应引起重视。与阴沟肠杆菌类似与阴沟肠杆菌类似u革兰阴性小杆菌。革兰阴性小杆菌。u 周身鞭毛，有动力。周身鞭毛，有动力。u无芽胞，多无荚膜。无芽胞，多无荚膜。 生物学特性生物学特性1. 形态结构形态结构黏质沙雷菌是细菌中最小的，可用黏质沙雷菌是细菌中最小的，可用于于检查除菌滤器的效果检查除菌滤器的效果 兼性厌氧菌，营养要求不高兼性厌氧菌，营养要求不高 普通琼脂上形成普通琼脂上形成不透明，白不透明，白色、红色或粉红色菌落色、红色或粉红色菌落。产生色素产生色素有两种：灵菌红素有两种：灵菌红素（非水溶）和吡羧酸（水（非水溶）和吡羧酸（水溶）。溶）。 在液体培养基中生长呈在液体培养基中生长呈均匀均匀混浊混浊，产生色素的菌株使菌，产生色素的菌株使菌悬液变红悬液变红。2. 培养特性培养特性粘质沙雷菌菌落粘质沙雷菌菌落深红沙雷菌菌落深红沙雷菌菌落34沙雷菌在液体培养基35沙雷的红沙雷的红同一沙雷菌不同温度下培养产生的红色素有差异同一沙雷菌不同温度下培养产生的红色素有差异同一沙雷菌在同一块平板上产生的色素有差异同一沙雷菌在同一块平板上产生的色素有差异36沙雷的红沙雷的红污红了母乳黄斑了树叶染红了秋虫嗜虫沙雷菌被沙雷菌污染的母乳37假咯血红色尿布综合征沙雷的红沙雷的红沙雷菌可在某些免疫力低下患者中引起的肺炎，此时，其痰液可呈红色，易误认为咯血，称之为“假咯血综合征”38粘质沙雷菌（Serratiamarcescens）L.part.adj.marcescens,becoming weak, fading away.词源和翻译： marcescens，拉丁语分词形容词，英文词义为“becoming weak, fading away”， 中文含义为“变弱的，逐渐消失的（意指人工培养过程中，该菌的红色色素易变弱和逐渐消失）”沙雷的红沙雷的红39沙雷菌可抑制霉菌生长沙雷菌可抑制霉菌生长IMVC: -/+ 脂酶、明胶酶、脂酶、明胶酶、DNA酶酶：阳性：阳性3. 生化反应特性生化反应特性沙雷菌属种间鉴别沙雷菌属种间鉴别生化反应黏黏质质沙雷沙雷菌菌黏质生物群1虫媒沙雷菌液化沙液化沙雷菌生雷菌生物群物群芳香生物群1居泉沙雷菌普利毛斯沙雷菌芳香生物群2无花果沙雷菌深红深红沙雷沙雷菌菌L阿拉伯糖发酵-+D-山梨糖醇发酵+-+V+-鸟氨酸脱羧酶+V-+-甲基红甲基红(-)+(-)+VV(-)纤维二糖发酵-+-+VPVP+V+V-(+)+v+D-阿拉伯醇发酵-V-+-+(+)赖氨酸脱羧酶+V-+-+-V红色素VNA-+-+微生物学检微生物学检验验1. 检验程序检验程序（痰、尿液、血液等）（痰、尿液、血液等）全面生化反应鉴定全面生化反应鉴定 直接涂片直接涂片 菌株的培养与分离菌株的培养与分离 增菌肉汤、血平板、麦康凯。增菌肉汤、血平板、麦康凯。 鉴定：鉴定：2. 检验方法检验方法观察菌落观察菌落( (色素色素）涂片革兰染色涂片革兰染色革兰阴性杆革兰阴性杆菌、氧化酶阴性、葡萄糖菌、氧化酶阴性、葡萄糖F(F(定科试验定科试验)葡萄糖葡萄糖酸盐、苯丙氨酸脱氨酶（定群）酸盐、苯丙氨酸脱氨酶（定群）属间、种属间、种间鉴定。间鉴定。微生物学检微生物学检验验种属鉴定种属鉴定u可产生脂酶、明胶酶和可产生脂酶、明胶酶和DNA酶酶u能发酵甘露醇、甘露糖、海藻糖、麦芽糖能发酵甘露醇、甘露糖、海藻糖、麦芽糖等等u苯丙氨酸脱氨酶、硫化氢均为阴性苯丙氨酸脱氨酶、硫化氢均为阴性u气味与色素气味与色素肠杆菌科细菌复习肠杆菌科细菌复习 肠杆菌科细菌在形态结构、培养特征和生化反应的共性是什么？形态结构共性形态结构共性：革兰阴性杆菌、多有鞭毛和菌毛、无芽孢培养特征共性培养特征共性：兼性厌氧、营养要求不高生化反应共性生化反应共性：氧化酶阴性、发酵葡萄糖产酸、硝酸盐还原阳性、触酶阳性 临床常见肠杆菌科细菌中无鞭毛的有哪些？志贺菌属、克雷伯菌属、志贺菌属、克雷伯菌属、鼠疫耶尔森菌（鼠疫耶尔森菌（35无动无动力，力，25有）有）n临床引起腹泻的肠杆菌科细菌主要有哪些？志贺菌属、沙门菌属、耶尔森菌属、埃希菌属部分菌志贺菌属、沙门菌属、耶尔森菌属、埃希菌属部分菌n与医院感染有关、条件致病的肠杆菌科细菌有哪些？埃希菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、枸橼酸菌属、变形杆菌埃希菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、枸橼酸菌属、变形杆菌属、沙雷菌属等属、沙雷菌属等 肠杆菌科细菌的哪种特性已被用于制作肠道选择性培养基？耐胆盐耐胆盐n肠道弱选择性培养基主要有哪些？Mac、EMB、中国蓝、中国蓝n肠道强选择性培养基主要有哪些？SS 肠道选择性培养基中底物主要是什么？乳糖乳糖nMac和SS培养基中指示剂是什么？中性红中性红n肠杆菌科细菌表面抗原有何特点？表面抗原存在可阻断表面抗原存在可阻断O抗原与相应抗体之间的抗原与相应抗体之间的反应，加热处理能消除这种作用。反应，加热处理能消除这种作用。 临床常见的不分解乳糖的肠杆菌科细菌主要有？沙门菌属、志贺菌属、耶尔森菌属、变形杆菌属沙门菌属、志贺菌属、耶尔森菌属、变形杆菌属n临床常见的分解乳糖的肠杆菌科细菌主要有？埃希菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、枸橼埃希菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、枸橼酸菌属、沙雷菌属（除外黏质沙雷菌）酸菌属、沙雷菌属（除外黏质沙雷菌）n脲酶阳性的肠杆菌科细菌主要有？克雷伯菌、变形杆菌、克雷伯菌、变形杆菌、小肠结肠炎耶尔森菌、小肠结肠炎耶尔森菌、 埃希菌属中引起腹泻的主要有？ETEC、EHEC、EIEC、EPEC、EAECnO157大肠埃希菌是？主要生化特点？ETEC（STEC）、不发酵山梨醇不发酵山梨醇n大肠埃希菌的KIA、IMViC结果？KIA: AA+-, IMViC: +- 硫化氢阳性的肠杆菌科细菌主要是？沙门菌属、变形杆菌属、弗劳地枸橼酸杆菌沙门菌属、变形杆菌属、弗劳地枸橼酸杆菌 描述大肠埃希菌在Mac 和 SS上的菌落特点红色菌落红色菌落n如何从腹泻患者粪便标本中检出福氏志贺菌？1.粪便标本接种于粪便标本接种于Mac和和SS, 35培养培养18-24h, 或先接种或先接种GN肉汤培养后转种肉汤培养后转种Mac和和SS2. 挑挑Mac和和SS上无色或淡黄色小菌落涂片革兰染色：上无色或淡黄色小菌落涂片革兰染色： 革兰阴性杆菌，氧化酶（革兰阴性杆菌，氧化酶（-）同时挑取黄色菌落转种同时挑取黄色菌落转种KIA，35培养过夜。培养过夜。3. 该菌在该菌在 KIA上结果为上结果为: KA- -, 挑取挑取KIA上细菌转种进行肠杆菌科细菌全面生化鉴定，上细菌转种进行肠杆菌科细菌全面生化鉴定， 35培养培养18-24h 后可获得初步鉴定结果。后可获得初步鉴定结果。4. 挑取挑取KIA上细菌用志贺菌上细菌用志贺菌AD群群多价血清进行多价血清进行玻片凝集实验，如果发生凝集，怀玻片凝集实验，如果发生凝集，怀疑是志贺菌属细菌感染疑是志贺菌属细菌感染5. 再分别用志贺菌再分别用志贺菌A群、群、 B群、群、C群和群和D群单价血清进行玻片凝集实验，若与群单价血清进行玻片凝集实验，若与B群血群血清凝集，怀疑是福氏志贺菌感染，再进一步用因子血清将其鉴定到血清型。清凝集，怀疑是福氏志贺菌感染，再进一步用因子血清将其鉴定到血清型。