催乳素(PRL )作业指导书.doc

1. 分析原理采用双抗夹心法原理，整个过程18分钟完成。·第1步：10l标本和一份生物素抗泌乳素特异性单克隆抗体一起孵育，反应形成复合体。·第2步：添加钌复合体a标记泌乳素特异单克隆抗体和链酶亲和素包被的微粒后，反应生成一“三明治”样抗原抗体复合体，并在生物素和链酶亲和素的相互作用下形成固相。·第3步：将反应液吸入检测池中，检测池中的微粒通过电磁作用吸附在电极表面。未结合的物质通过ProCell除去。在电极上加以一定的电压，使复合体化学发光，用光电倍增器检测发光的强度。通过检测仪的定标曲线得到最后的检测结果，定标曲线是通过2点定标点和试剂条形码上获得的主曲线生成的。2. 标本要求只有按如下方法收集的标本才适合用本试剂盒检测。血清必须用标准试管或内有分离胶的试管收集。肝素锂和K3-EDTA血浆。 （原则：回收率90110；斜率0.91.1；相关系数>0.95；<±2×分析敏感度（LDL，最低检测水平）相关因子>0.95）. 稳定性： 28°C可保存14小时；在-20°C可保存6月，只可冻溶一次14。内有分离胶的试管收集的血清标本稳定性：2-8°C 24小时（注意此数据由试管厂商提供）。 选择检测时市场上能获得的标本收集试管收集标本和检测，不是所有能获得的厂商的试管均可用于检测。不同厂商标本收集系统可能含有不同材料，某些情况下会影响检测结果。 在使用原始试管处理标本时，应遵循试管生产商所提供的指导。 如标本中有沉淀出现，必须先作离心处理再进行分析。已经加热失活的标本无法分析。使用叠氮化物作为稳定剂的标本或质控液无法分析。 检测前，请确保患者标本、定标液及质控液放置在2025°C的环境中。 由于蒸发因素的影响，标本、定标液及质控液在放入分析仪后请在2小时内完成测定。3. 试剂、校准品、质控品和其他所需材料采用罗氏原装配套试剂。试剂：M 链酶亲和素包被的微粒（透明瓶盖）每瓶6.5ml 。链酶亲和素包被的微粒，0.72mg/ml；结合力：470ng 生物素/mg 微粒；微粒经过防腐处理。R1 生物素化泌乳素特异性抗体（灰色瓶盖）每瓶10ml。生物素化单克隆抗泌乳素抗体（鼠）：0.7mg/L；磷酸盐缓冲液：50mmol/L，PH 值7.0；经过防腐处理。R2 钌复合物标记的泌乳素特异性抗体（黑色瓶盖）每瓶10ml。钌复合物标记抗泌乳素单克隆抗体（鼠）：0.35mg/L；磷酸盐缓冲液：50 mmol/L，PH 值7.0；经过防腐处理。其他所需材料：常规实验设备Elecsys E 170/E 411Elecsys 系统清洗液（SysClean）,货号Elecsys E 170分析仪所需材料:Elecsys系统缓冲液 （ProCell M）,货号Elecsys检测池洗液（CleanCell M）,货号ElecsysPC/CC杯,货号Elecsys清洗液（ProbeWash M），货号03005712Elecsys反应杯/加针头/废物袋（CUP/TIP），货号Elecsys系统清洗适配器（SysCleanAdapterM），货号Elecsys E 411分析仪所需材料:Elecsys 系统缓冲液（ProCell），货号Elecsys测量池清洗液（CleanCell），货号Elecsys 系统清洗液（SysWash），货号Elecsys适配器 （Adapter for SysClean），货号11933159,Elecsys反应杯（CUP），货号Elecsys加样头（TIP），货号4. 仪器和校准使用仪器：瑞士罗氏诊断公司生产Elecsys 2010/E 170/E 411全自动电化学发光免疫自动分析仪仪器校准：每批Elecsys Prolactin试剂盒上都有条形码记录各批号试剂特定的定标信息。预先确定的主曲线适用于用Elecsys Prolactin CalSet试剂盒进行测定的分析仪。定标频率：每批试剂必须用新鲜试剂（试剂经仪器注册24小时以内）标定一次，如再次标定即根据下列要求：·一个月（同一批号试剂）· 7天（放置仪器上的同一试剂盒）·根据要求进行标定：如质控结果超出范围时。5. 操作步骤（以E 170为例）5.1 校准操作步骤：在编缉各项目的参数时，已经在ApplicationCalib菜单中定义好了定标类型和几点定标。因此在对各项目进行定标时，只需在定标菜单Calibration中进行即可。进入CalibrationStatus菜单，用鼠标选择需定标的项目，再根据需要点单点定标（BLANK键）或两点定标（TWO POINT键）、跨距定标（SPAN键）、多点定标（FULL键），再选择其它项目进行相应选择，最后点SAVE，将定标物放入在CalibrationCalibrator中定义好的位置，点Start，再点Start，仪器开始定标。 在CalibrationStatus菜单中看定标结果，点Calibration Result键看定标结果，点Reaction Monitor键看每个定标物的反应曲线。5.2 样本检测程序： 单个样本输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点SAVE键，样本号自动累加。批量常规标本的输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入起始标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点REPEAT，输入该批标本的最后一个标本号，点OK即可。进样分析，将标本按在Workplace菜单中输入的标本号顺序在样本架上排好，放入进样盘内,按START键，输入该批上机标本的起始标本号，再点START键，仪器自动开始推架检测标本。6. 质量控制Elecsys通用质控品（PreciControl ）1和2或其它合适的质控品。各浓度区域的质控至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。7. 计算方法对每一个标本，仪器会自动计算泌乳素含量，单位为uIU/ml，ng/ml 或mIU/L 。换算方法是IU/ml ×0.047=ng/mlng/ml ×21.2=IU/ml（mIU/l）8. 参考范围一项研究对泌乳素进行了评估，共检测了300份健康人群的样品，结果如下：百分位数502.597.5502.597.5nIU/mlng/ml男性102155863247.304.0415.2女性(非孕妇)19822510249610.64.7923.3每个实验室必须调查各自患者群体的参考范围变异性，必要时根据具体情况制订自己的参考范围。9. 分析性能精密度10. 干扰因素测定结果不受黄疸（胆红素<513mol/L或<30mg/dl）, 溶血（血红蛋白<0.932 mmol/L或<1.5g/dl）, 高脂血（症）(脂肪乳剂< 1500mg/dl）和生物素（< 164 nmol/L或<40 ng/ml）的影响。(标准：回收率90110)。对于因某些疾病需要而接受高剂量生物素治疗的患者（> 5mg/天），必须在末次生物素治疗8小时后采集标本。浓度达1100U/ml的风湿因子对测定无影响。高达270,000 IU/mL (12,690 ng/mL)大剂量不产生钩状效应。体外对16种常用药物进行试验未发现有药物影响检测结果。由于检测试剂中含有单克隆抗体，因此某些接受单克隆鼠抗体治疗或诊断的患者标本检测结果可能有误。试剂盒附带有试剂添加剂以减少以上不良影响。少数病例中极高浓度的链霉抗生物素蛋白和钌抗体会影响测定结果。测定泌乳素时，需注意测定浓度和血样采集时间有关，这是因为泌乳素经垂体分泌，受生物钟影响。哺乳和压力会促进生理性泌乳素分泌。另外，血清泌乳素浓度升高与多种药物（如dibenzodiazepine抗精神病药、吩噻嗪）、TRH和雌激素有关5,6,7。多巴胺、左旋多巴和麦角胺抑制泌乳素的分泌。许多研究报道女性内分泌疾病患者或女性怀孕期间其血清中存在巨泌乳素1,8,9。同时也描述了使用不同免疫分析法测定的与单体泌乳素（22-23kD）对应的血清巨泌乳素不同测定浓度。这样可判定与所用免疫分析法有关的高泌乳素的测定8,13,17。若怀疑测定的高泌乳素值，则推荐使用聚乙二醇（PEG）进行沉淀预处理以判定有生物活性的单体泌乳素浓度10,11,12,13,14,15,16,17,18,19。详细信息参见“使用聚乙二醇（PEG）沉淀作用对标本进行预处理”部分。必须结合患者病史，各项实验室检查及其它临床资料来综合评估测定结果。11. 临床意义泌乳素由垂体前叶合成和分泌。此激素共有198 个氨基酸，分子量约为22-23kD。血清中有三种形式的泌乳素，其中具生物和免疫活性的单体（“小的”）形式泌乳素最多（约80%），5-20%为无生物学活性的二聚体（大的）形式，另0.5-5为较低生物学活性的四聚体（“大-大”）形式1。泌乳素的靶器官是乳腺，能促进乳腺组织生长发育和分化。高浓度的泌乳素会抑制卵巢类固醇激素合成和垂体促性腺激素合成和分泌。 在怀孕期间，受雌激素和黄体酮合成增加的影响泌乳素浓度升高。泌乳素刺激乳汁分泌，使产后期转至泌乳期。高泌乳素血症（男性和女性）主要原因是生育疾患。泌乳素测定可用于诊断经期不排卵、高泌乳素性闭经和乳漏、男子乳腺过度发育以及精子缺乏。若怀疑乳腺癌和垂体肿瘤，也需测定泌乳素2,3。Elecsys Prolactin II 试剂采用两种人泌乳素特异单克隆抗体。这两种抗体和多数巨泌乳素的反应较弱。12参考文献1. Johnson MR, Carter G, Grint C, Lightman SL. Relationship betweenovarian steroids, gonadotrophins and relaxin during the menstrualcycle. Acta Endocrinol 1993;129:121-125.2. Runnebaum B, Rabe T. Gynäkologische Endokrinologieund Fortpflanzungsmedizin Springer Verlag 1994; Band1:36-38,70,116 Band 2:137,360,398-399,408-409,422-423. ISBN3-540-57345-3, ISBN 3-540-57347-x.3. Juhl UM, Rippegather G, Weller J, Zawta B. Important Facts onReproduction Medicine/Fertility Diagnosis, Questions and Answers,1994. Boehringer Mannheim, Cat. No. 1322958.4. Guillaume J, Benjamin F, Sicuranza B, Wang CF, Garcia A,Friberg J. Maternal serum levels of estradiol, progesterone andh-Choriongonadotropin in ectopic pregnancy and their correlation withendometrial histologic findings. Surg Gynecol Obstet 1987;165:9-12.5. Thienpont LM, Verhseghe PG, Van Brussel KA, De Leenheer AP.Efforts by industry toward standardization of serum estradiol-17measurements. Clin Chem 1998;44(3):671-674.6. Bablok W, et al. A General Regression Procedure for MethodTransformation. J Clin Chem Clin Biochem 1988;26:783-790.编写： 审核： 批准：批准日期： 年 月 日