实验反应和反应讲稿.ppt

实验反应和反应第一页，讲稿共二十四页哦一、多糖的显示一、多糖的显示PASPAS反应反应（一）实验目的（一）实验目的（二）实验原理（二）实验原理（三）实验用品（三）实验用品（四）实验方法（四）实验方法（五）实验结果（五）实验结果（六）注意事项（六）注意事项（七）作业（七）作业第二页，讲稿共二十四页哦（一）实验目的（一）实验目的n通过通过PASPAS反应，了解糖原显示的基本原理反应，了解糖原显示的基本原理、方法以及糖原在细胞中的分布。、方法以及糖原在细胞中的分布。第三页，讲稿共二十四页哦（二）实验原理（二）实验原理nPASPAS反应是显示多糖的最经典、也是最直接反应是显示多糖的最经典、也是最直接的细胞化学方法。的细胞化学方法。n用具有强氧化作用的用具有强氧化作用的过碘酸过碘酸处理使多糖中葡处理使多糖中葡萄糖的乙二醇基氧化成两个游离的萄糖的乙二醇基氧化成两个游离的醛基醛基，醛，醛基与基与SchiffSchiff试剂结合可形成试剂结合可形成紫红紫红色的化合色的化合物，颜色深浅与多糖含量成正比。物，颜色深浅与多糖含量成正比。n单糖易被抽提掉，多糖包括糖原、粘多糖、单糖易被抽提掉，多糖包括糖原、粘多糖、粘蛋白、糖蛋白、糖脂、淀粉和纤维素。粘蛋白、糖蛋白、糖脂、淀粉和纤维素。第四页，讲稿共二十四页哦 碱性品红为红色，与能产生碱性品红为红色，与能产生SO2的试剂作用后（如的试剂作用后（如偏重亚硫酸钠与盐酸作用，还原出偏重亚硫酸钠与盐酸作用，还原出SO2），成为无色），成为无色的的Schiff试剂试剂,再与再与醛基醛基结合呈紫红色。结合呈紫红色。第五页，讲稿共二十四页哦第六页，讲稿共二十四页哦第七页，讲稿共二十四页哦（三）实验用品（三）实验用品n1.1.材料：马铃薯块茎材料：马铃薯块茎n2.2.试剂：试剂：0.5%0.5%高碘酸、高碘酸、schiffschiff试剂、亚试剂、亚硫酸水、硫酸水、7070酒精酒精n3.3.器材：显微镜、刀片、镊子、载玻片器材：显微镜、刀片、镊子、载玻片、盖玻片、水浴锅、盖玻片、水浴锅第八页，讲稿共二十四页哦（四）实验方法（四）实验方法1 1、取马铃薯块茎切成薄片，浸入过碘酸溶液、取马铃薯块茎切成薄片，浸入过碘酸溶液1010分钟；分钟；2 2、用、用7070的酒精冲洗的酒精冲洗1 1次；次；3 3、将薄片放入、将薄片放入SchiffSchiff试剂中试剂中20202525分钟；分钟；4 4、在新配亚硫酸水中洗、在新配亚硫酸水中洗3 3次，每次次，每次 1 min1 min；5 5、蒸馏水洗片刻；、蒸馏水洗片刻；6 6、将薄片放在载玻片上吸去水分，加上盖玻片，镜下观、将薄片放在载玻片上吸去水分，加上盖玻片，镜下观察。察。第九页，讲稿共二十四页哦PASPAS反应结果反应结果（五）实验结果（五）实验结果 马铃薯块茎组织细胞内可见到紫红色或深红色淀粉马铃薯块茎组织细胞内可见到紫红色或深红色淀粉颗粒。颗粒。第十页，讲稿共二十四页哦（六）（六）注意事项注意事项 n按上述操作，细胞中水溶性糖类已丧失，按上述操作，细胞中水溶性糖类已丧失，被染色的是被染色的是不溶性不溶性的碳水化合物。的碳水化合物。第十一页，讲稿共二十四页哦（七）作业（七）作业n1 1、绘制实验结果，并描述。、绘制实验结果，并描述。第十二页，讲稿共二十四页哦（一）实验目的（一）实验目的（二）实验原理（二）实验原理（三）实验用品（三）实验用品（四）实验方法（四）实验方法（五）实验结果（五）实验结果（六）注意事项（六）注意事项（七）作业（七）作业二、二、DNADNA的显示的显示 Feulgen Feulgen反应反应第十三页，讲稿共二十四页哦1.1.了解了解FeulgenFeulgen染色反应原理；染色反应原理；2.2.掌握掌握FeulgenFeulgen染色的方法，观察染色染色的方法，观察染色结果。结果。（一）实验目的（一）实验目的第十四页，讲稿共二十四页哦（二）实验原理（二）实验原理 根据根据DNA经盐酸水解后经盐酸水解后，打开了嘌呤碱基和脱氧核，打开了嘌呤碱基和脱氧核糖连接的键，在脱氧核糖的糖连接的键，在脱氧核糖的一端形成一端形成游离的醛基游离的醛基。这些。这些醛基就在原位与醛基就在原位与Schiff试剂结试剂结合，形成紫红色的化合物。合，形成紫红色的化合物。所以凡有所以凡有DNA的部位，就呈的部位，就呈现为紫红色。现为紫红色。第十五页，讲稿共二十四页哦图图 Feulgen反应的染色原理反应的染色原理 第十六页，讲稿共二十四页哦 DNA染色后，除形成紫红色化合物外，染色后，除形成紫红色化合物外，必然有多余的必然有多余的A和和B分子，分子，B分子很容易被氧分子很容易被氧化转变为化转变为A有色分子，从而造成有色分子，从而造成伪差伪差。因此。因此必须迅速地多次用现配的必须迅速地多次用现配的SO2水清洗，使水清洗，使A分分子转变为无色的子转变为无色的B分子，消除染色的伪差。分子，消除染色的伪差。第十七页，讲稿共二十四页哦nFeulgenFeulgen反应是特异性显示反应是特异性显示DNADNA的最经典的最经典方法，即可进行方法，即可进行DNADNA定位显示，又可用显定位显示，又可用显微分光光度计进行定量分析。微分光光度计进行定量分析。nFeulgenFeulgen反应对组织中反应对组织中DNADNA的检测具有的检测具有高度专一性。组织中除高度专一性。组织中除DNADNA外还有多糖外还有多糖、RNARNA和其他自由醛基可以被盐酸酸解掉和其他自由醛基可以被盐酸酸解掉。第十八页，讲稿共二十四页哦（三）实验用品（三）实验用品1.材料材料 洋葱鳞茎内表皮或根尖、小麦根尖洋葱鳞茎内表皮或根尖、小麦根尖2.试剂试剂 1 mol/L HCl、Schiff试剂、试剂、亚硫亚硫酸水溶液酸水溶液(漂白液漂白液)3.器材器材 显微镜、刀片、镊子、载玻片、盖玻片、显微镜、刀片、镊子、载玻片、盖玻片、水浴锅水浴锅第十九页，讲稿共二十四页哦（四）实验方法（四）实验方法取小麦根尖和洋葱内表皮（绿豆大小）浸入预热至取小麦根尖和洋葱内表皮（绿豆大小）浸入预热至6060的的1N HCl1N HCl中水解，时间中水解，时间10 min10 min。蒸馏水洗后，转入蒸馏水洗后，转入SchiffSchiff液中液中避光避光染染30 min30 min，待根尖变，待根尖变为深红色；为深红色；在新配亚硫酸水中洗在新配亚硫酸水中洗3 3次，每次次，每次 1 min1 min；自来水洗自来水洗 5 min5 min，在载玻片上切下深红色根尖备用；，在载玻片上切下深红色根尖备用；制片镜下观察，根尖镊子捣碎压片。制片镜下观察，根尖镊子捣碎压片。第二十页，讲稿共二十四页哦（五）实验结果（五）实验结果第二十一页，讲稿共二十四页哦蚕豆根尖细胞蚕豆根尖细胞Feulgen反应反应细胞核（紫红色）细胞核（紫红色）核仁（无色）核仁（无色）第二十二页，讲稿共二十四页哦小麦根尖细胞小麦根尖细胞Feulgen反应反应细胞核（紫红色）细胞核（紫红色）核仁（无色）核仁（无色）第二十三页，讲稿共二十四页哦第二十四页，讲稿共二十四页哦