实验六植物抗氧化酶活性的测定精.ppt

实验六植物抗氧化酶活性的测定第1页，本讲稿共14页POD、SOD、CAT（AOX）（PPO）第2页，本讲稿共14页抗氧化抗氧化酶与植物抗逆性关系与植物抗逆性关系第3页，本讲稿共14页Journal of Experimental Botany,2009，60（2）：377390H2O2H2O2第4页，本讲稿共14页李忠光，2009.10第5页，本讲稿共14页POD一、实验原理一、实验原理Peroxidase,POD第6页，本讲稿共14页（ROS,H2O2）第7页，本讲稿共14页PPOPolyphennol oxidase,PPO第8页，本讲稿共14页抗氧化抗氧化酶动力学曲力学曲线第9页，本讲稿共14页植物抗氧化酶提取和测定参考文献第10页，本讲稿共14页二、二、实验方法方法1、提取：分、提取：分别取取0.5 g实验材料材料加入少加入少许石英砂和石英砂和3 ml提提取液（取液（50mmol/L PBS,pH5.8,内含内含0.mmol/LEDTA,1%PVP）充分研磨充分研磨转入离心管中入离心管中用用2 ml提取液提取液洗研洗研钵 5000 rpm离心离心10 min 上清液定容至上清液定容至5 ml 用用于于测定定POD和和PPO酶活性或分装后活性或分装后转至至-20或或-80保存。保存。第11页，本讲稿共14页2、POD测测定定：取取POD反反应应混合液（混合液（10mmol/L愈愈创创木酚，木酚，5 mmol/L H2O2,用用PBSPBS溶解）溶解）2.90 ml2.90 ml，25 水浴水浴5 min，加入加入酶酶液液100 m ml（空白（空白调调零用提取液取代），立即零用提取液取代），立即记时记时，摇摇匀，匀，读读出反出反应应30 s和和3 min时时的的A A470470。用。用计计算算PODPOD活性。活性。3、PPO测测定：取定：取PPO反反应应混合液（混合液（20 mmol/L邻邻苯二酚，用苯二酚，用PBS溶解）溶解）2.8 ml，25 水浴水浴5 min，加入，加入酶酶液液0.2 ml（空（空白白调调零用零用提取液提取液取代），立即取代），立即记时记时，摇摇匀，匀，读读出反出反应应 30 s和和2 min时时的的A410。以以每分每分钟钟A A值变值变化化0.010.01所需要的所需要的酶酶液的液的量量为为一个活力一个活力单单位（位（U U），则则：第12页，本讲稿共14页POD activities=(mmol.g-1FWmin-1)PPO activities=(U.g-1FW)4、计算、计算第13页，本讲稿共14页5、思考题、思考题5.1 简述植物POD和PPO的生理意义。5.2在论述呼吸代谢多途径及其生理意义。第14页，本讲稿共14页