实验细菌的简单染色和革兰氏染色.pptx

革兰氏染色C.Gram（革兰）于1884年发明的一种鉴别不同类型细菌的染色方法。第1页/共26页用碱性染料结晶紫对菌液涂片进行初染用碘溶液进行媒染，其作用是提高染料和细 胞间的相互作用从而使二者结合得更牢固。用乙醇或丙酮冲洗进行脱色。在经历脱色后 仍将结晶紫保留在细胞内的为革兰氏阳性细 菌，而革兰氏阴性细菌的结晶紫被洗掉，细 胞呈无色。用一种与结晶紫具有不同颜色的碱性染料对 涂片进行复染。例如沙黄，它使原来无色的 革兰氏阴性细菌最后呈现桃红到红色，而革 兰氏阳性细菌继续保持深紫色第2页/共26页第3页/共26页实验三实验三 细菌的简单染色和细菌的简单染色和革兰氏染色革兰氏染色第4页/共26页细菌的简单染色和革兰氏染色细菌的简单染色和革兰氏染色 一 目的要求 二 基本原理 三 实验材料 四 无菌操作过程 五 操作步骤 六 实验报告 七 思考题第5页/共26页一 目的要求1 1 学习制染色片技术，学习简单染色 革兰氏染色原理，理解着色机理。2 2学习并掌握无菌操作的技术。3 3 掌握简单染色 革兰氏染色的方法，并能正确染色4 巩固显微镜油镜的使用方法。第6页/共26页（一）细菌的简单染色原理（二）革兰氏染色基本原理二 基本原理第7页/共26页l细菌细胞微小，且含水量较多，在普通光镜下表现为无色透明，不易观察，所以必须进行染色处理，使细胞着色，便于观察。l简单染色是使用单一染料染色，可用于观察细菌形态、大小、及排列方式.l染色前一般要将细胞固定，其目的是杀死菌体并使之粘附于玻片上，还可以增强菌体的着色能力。固定有加热法和化学法两种，无论采用何种方法均应维持细胞原有形态。（一）细菌的简单染色原理第8页/共26页（二）革兰氏染色基本原理 革兰氏染色是用于细菌鉴别的一种重要染色方法。它是根据革兰氏阳性细菌、阴性细菌细胞壁结构、组成的不同而使用一系列的染色处理使之差别显色。其染色方法是先将细菌分别用结晶紫和碘液初染媒染后，乙醇脱色，再经复染剂复染。最终被染成红色的是革兰氏阴性细菌；被染成紫色的是革兰氏阳性细菌。第9页/共26页占细胞壁的10%占细胞壁的90%第10页/共26页第11页/共26页1 1、细胞壁 革兰氏阳性细菌的细胞壁第12页/共26页革兰氏染色与细胞壁：革兰氏阳性阴性细菌的细胞壁对比第13页/共26页v革兰氏染色原理：革兰氏染色原理：第一步：第一步：结晶紫使菌体着上紫色结晶紫使菌体着上紫色第二步：第二步：碘和结晶紫形成大分子复合物，分子大，能被细胞壁阻留在细胞内。碘和结晶紫形成大分子复合物，分子大，能被细胞壁阻留在细胞内。第三步：第三步：酒精脱色，细胞壁成分和构造不同，出现不同的反应。酒精脱色，细胞壁成分和构造不同，出现不同的反应。G G+菌：菌：细胞壁厚，肽聚糖含量高，交联度大，当乙醇脱色时，肽聚糖因脱水而孔径缩细胞壁厚，肽聚糖含量高，交联度大，当乙醇脱色时，肽聚糖因脱水而孔径缩小，故结晶紫小，故结晶紫-碘复合物被阻留在细胞内，细胞不能被酒精脱色，仍呈紫色。碘复合物被阻留在细胞内，细胞不能被酒精脱色，仍呈紫色。GG菌：菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，因其含脂量高肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，因其含脂量高,乙醇将乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，酒精将细胞脱色，细胞无色，蕃红碘复合物溶出细胞壁，酒精将细胞脱色，细胞无色，蕃红复染后呈红色。复染后呈红色。第14页/共26页1234？第15页/共26页三 实验材料大肠杆菌（24 24 h h 培养）斜面菌种枯草杆菌（16 16 h h 培养）斜面菌种第16页/共26页四 无菌操作过程无菌操作：不让除我们接种的微生物以外 其它微生物侵入的技术。第17页/共26页第18页/共26页（一）简单染色操作步骤1 1涂片：载玻片、无菌水、斜面菌种、无菌操作、均匀的薄层2 2干燥：3 3固定：加热固定4 4染色：结晶紫染1 1minmin或蕃红染2-32-3minmin或石炭酸复红染1 1minmin。5 5水洗：6 6 干燥：7 7镜检：低倍镜观察以确定目标和范围，再换用油镜观察绘图。五五 操作步骤操作步骤第19页/共26页第20页/共26页（二）革兰氏染色操作步骤1 1涂片：方法同单染色，然后干燥、固定。2 2初染：滴加结晶紫染色1 1minmin，后用水冲洗。3 3媒染：滴加碘液染色1-21-2minmin，后用水冲洗，甩尽残余水4 4脱色：用95%95%乙醇冲洗3030秒（需要严格控制时间和浓度），然后立即用水冲洗。5 5复染：用蕃红或石炭酸复红覆盖涂片进行复染，蕃红染 2-3 2-3minmin，如果石炭酸复红染1 1minmin。水洗，晾干。6 6镜检：先用低倍镜观察，后用油镜观察第21页/共26页阳性菌阳性菌阴性菌阴性菌1234第22页/共26页六六 实验报告实验报告1 写出实验目的2 写出简单染色、革兰氏染色的基本原理3 根据实验结果绘出简单染色和革兰氏染色的结果图。第23页/共26页菌名：放大倍数：细菌简单染色结果图细菌革兰氏染色结果图要求：标出菌名、颜色、阳性或阴性菌放大倍数：第24页/共26页七七 思考思考题题1 1 细菌简单染色操作过程中应注意哪些事项？2如果对一未知菌进行革兰氏染色，如何能确证染色结果正确可靠？3 3 为什么说95%95%酒精脱色是革兰氏染色的关键步骤？下次实验内容：下次实验内容：实验四 微生物细胞大小的测定及显微镜下直接计数第25页/共26页感谢您的观看！第26页/共26页