菌落总数测定作业指导书.pdf
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1、菌落总数测定作业指导书1.0 目的规定菌落总数的测定方法。2.0 范围适用于产品、原辅材料、流程卫生中菌落总数的检测。3.0 术语3.1 菌落总数食品检样经过处理 , 在一定条件下 ( 如培养基、培养温度和培养时间等) 培养后 , 所得每g(mL)检样中形成的微生物菌落总数。4.0 作业流程图见附录 A 5.0 内容及要求5.1 设备和材料除微生物实验室常规无菌及培养设备外,其他设备和材料如下:5.1.1 恒温培养箱: 361、3015.1.2 恒温水浴锅: 4615.1.3 天平:感量 0.1g 5.1.4 均质器5.1.5 无菌吸管: 1mL(具 0.01mL 刻度) 、10mL(具 0.
2、1mL 刻度)或微量移液器及吸头。5.1.6 无菌锥形瓶:容量250ml、500ml 5.1.7 无菌培养皿:直径90mm 5.1.8 菌落计数器5.1.9 无菌玻璃珠:直径约5mm 5.1.10 无菌试管: 18mm 180mm 5.2 培养基和试剂5.2.1 平板计数琼脂培养基。5.2.2 75% 乙醇溶液。5.2.3 无菌生理盐水:称取8.5g 氯化钠溶于 1000ml 蒸馏水中 121高压灭菌 15min。5.3 操作步骤5.3.1 样品的稀释5.3.1.1 固体和半固体样品:称取 25 g 样品置盛有 225 mL 生理盐水的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打 1 min 2 min
3、,制成 1:10 的样品匀液。5.3.1.2 液体样品:以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有 225 mL 生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成1:10 的样品匀液。5.3.1.3 用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液 1 mL,沿管壁缓慢注于盛有 9 mL 稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成1:100 的样品匀液。5.3.1.4 按5.3.1.3 操作程序,制备 10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次,换用1 次1 mL 无菌吸管或吸头。5.3.1.5 根据对样
4、品污染状况的估计,选择2 个3 个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),在进行 10 倍递增稀释时,吸取 1 mL 样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。同时,分别吸取1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。5.3.1.6 及时将 15 mL20 mL 冷却至 46 的平板计数琼脂培养基(可放置于46 1 恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。5.3.2 培养5.3.2.1 待琼脂凝固后将平板翻转,361 培养 48 h2 。5.3.2.2 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时,可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基(约4 mL),凝固后翻转
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- 菌落 总数 测定 作业 指导书
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