动物细胞基因工程课件 高中生物竞赛.pptx
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1、动物细胞基因工程,动物基因工程概念,应用DNA重组技术,按照人的意图,在基因水平上改变生物细胞的遗传特性,或应用现代生物技术,对动物细胞基因组进行操纵或改造的科学工程。,动物细胞基因工程的基本流程,目的基因的获得 载体的选择与构建 重组DNA导入细胞 转化或转染细胞的筛选 重组 DNA 的鉴定,目的基因的获得,化学合成 基因文库 RT-PCR,载体,质粒载体,慢病毒载体,慢病毒(Lentivirus)载体是以人类免疫缺陷型病毒(HIV)为基础发展起来的基因治疗载体,它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力,并可以在体内长期的表达。慢病毒载体(LV)在基础科学研究、细胞治疗和基因治疗中的应用越来越
2、广泛。,慢病毒载体,构建稳定细胞株的必选载体; CAR-T细胞治疗中主要使用的病毒载体; 病毒包装周期,23周内完成; 慢病毒感染细胞多数需要聚凝胺(polybrene)辅助。 感染细胞后2-4天后呈现表达丰度。,腺病毒载体,腺病毒载体(adenovirus)是以腺病毒为原型进行基因功能改造而成的,无外壳的双链DNA病毒,病毒载体转基因效率高,体外实验通常接近100%的转导效率;可转导不同类型的人组织细胞,不受靶细胞是否为分裂细胞所限;容易制得高滴度病毒载体,在细胞培养物中重组病毒滴度可达11次方;进入细胞内并不整合到宿主细胞基因组,仅瞬间表达,安全性高。,腺病毒载体,基因瞬时表达首选载体;
3、高浓度浓缩,可用于动物实验; 病毒包装周期:68周; 腺病毒可以直接感染细胞无需polybrene辅助。 感染细胞后24h后呈现表达丰度。 毒种可在HEK293A细胞中反复扩增。,腺相关病毒(Adeno-associated Virus,AAV),属细小病毒科,为无包膜的单链线状DNA病毒。只有在腺病毒或者孢疹病毒等辅助病毒协助下,宿主才能产生具有感染性的AAV,所以AAV被称为腺相关病毒。,腺相关病毒(AAV)组织噬性,AAV1:骨骼肌嗜性(包括心肌),神经组织也可以感染; AAV2:有效转导肌肉,肝脏,脑组织,视网膜; AAV5:视网膜、神经系统、关节滑膜嗜性、肺; AAV8:肝嗜性,视网
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