实验一CTAB法提取植物基因组DNA.pdf
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1、实验一 CTAB 法提取植物基因组 DNA实验目的:学习从植物组织中(幼叶)提取基因组 DNA 勺基本原理和方法。实验原理:采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞,由于植物细胞匀浆含有多种酶 类(尤其是氧化酶类),其对DNA 勺抽提产生不利的影响,所以在抽提缓冲液中需 加入抗氧化剂或强还原剂(如筑基乙醇)以降低这些酶类的活性。在液氮中研磨,材料易于破碎,并减少研磨过程中各种酶类的作用。CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基漠化铉),是 一种阳离子去污剂,可溶解细胞膜并与核酸形成复合物。该复合物在高盐的溶液中(0.7mol/L NaCl)是
2、可溶的,通过有机溶剂抽提,去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀(CTAB溶于乙醇)即可使核酸分 离出来。CTA液在低于 15 度时会形成沉淀洗出,因此再将其加入冰冷的植物材料中 之前必须预热(65 度),且离心温度不要低于 15 度。实验步骤:1、取幼嫩的植物叶片(3-5g)剪碎液氮研磨成粉,转入 1.5ml 离心管内。加 入等体积的 65C 预热的 DN 靛取缓冲液置于 65C 的恒温水浴摇床上 1-2h(1.5h)。2、加入等体积的氯仿:异戊醇(24:1),轻轻上下颠倒 5 分钟,静置 5 分钟,之后于 12000rpm 离心 10 分钟。3、吸取上层水相,重复步骤 2 一次。4、吸取
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- 实验 CTAB 提取 植物 基因组 DNA
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