2021年10食品中大肠菌群计数测定的标准操作规程.docx
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1、精品word 可编辑资料 - - - - - - - - - - - - -.xxxxx 公司食品肠菌群计数测定的标准操作规程1 目的规食品肠菌群计数测定的标准操作规程;2 围编号起草人日期审核人日期批准人日期实施日期第版文件密级本标准规定了食品肠菌群Coliforms计数的方法;本标准适用于食品肠菌群的计数;3术语和定义3.1 大肠菌群 coliforms在肯定培育条件下能发酵乳糖.产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌;3.2 最可能数 most probable numbe,rMPN基于泊松分布的一种间接计数方法;4 责任质量部组织制订.化验室负责实施;5 容5.1 设备和材料除微
2、生物试验室常规灭菌及培育设备外,其他设备和材料如下:5.1.1 恒温培育箱: 36 1 ;5.1.2 冰箱: 2 5 ;5.1.3 恒温水浴箱: 46 1 ;-.可修编 - .第 1 页,共 12 页 - - - - - - - - - -精品word 可编辑资料 - - - - - - - - - - - - -.5.1.4 天平:感量 0.1 g;5.1.5 均质器;5.1.6 振荡器;5.1.7 无菌吸管: 1 mL具0.01 mL 刻度.10 mL具0.1 mL 刻度或微量移液器及吸头;5.1.8 无菌锥形瓶:容量500 mL;5.1.9 无菌培育皿:直径90 mm;5.1.10 pH
3、 计或pH比色管或精细 pH试纸;5.1.11 菌落计数器;5.2 培育基和试剂5.2.1 月桂基硫酸盐胰蛋白胨Lauryl Sulfate Tryptos,e LST肉汤:见附录 A中A.1;5.2.2 煌绿乳糖胆盐 Brilliant Green Lactose Bil,e BGLB肉汤:见附录 A中A.2;5.2.3 结晶紫中性红胆盐琼脂Violet Red Bile Aga,rVRBA:见附录 A 中A.3;5.2.4 磷酸盐缓冲液:见附录A中A.4;5.2.5 无菌生理盐水:见附录A中A.5;5.2.6 无菌1 mol/L NaOH :见附录 A中A.6;5.2.7 无菌1 mol/
4、L HCl :见附录 A中A.7;-.可修编 - .第 2 页,共 12 页 - - - - - - - - - -精品word 可编辑资料 - - - - - - - - - - - - -.5.3 大肠菌群 MPN计数法5.3.1 检验程序大肠菌群 MPN计数的检验程序见图1;-.可修编 - .第 3 页,共 12 页 - - - - - - - - - -精品word 可编辑资料 - - - - - - - - - - - - -.图1 大肠菌群 MPN计数法检验程序5.3.2 操作步骤5.3.2.1 样品的稀释5.3.2.1.1 固体和半固体样品:称取25 g 样品、放入盛有 225
5、mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯、8000 r/min 10000 r/min 均质1 min 2 min、或放入盛有 225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1 min 2-.可修编 - .第 4 页,共 12 页 - - - - - - - - - -精品word 可编辑资料 - - - - - - - - - - - - -.min,制成 1:10 的样品匀液;5.3.2.1.2 液体样品:以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或 生理盐水的无菌锥形瓶 瓶预置适当数量的无菌玻璃珠中,充分混匀,制成1:10的样品匀液;5.3.2.
6、1.3 样品匀液的 pH 值应在 6.5 7.5 之间,必要时分别用1 mol/L NaOH或1 mol/L HCl调剂;5.3.2.1.4 用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液 1 mL,沿管壁慢慢注入9 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中留意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面,振摇试管或换用1 支1 mL 无菌吸管反复吹打,使其混合匀称,制成1:100 的样品匀液;5.3.2.1.5 依据对样品污染状况的估量,按上述操作,依次制成十倍递增系列稀释样品匀液;每递增稀释1 次,换用 1 支1 mL无菌吸管或吸头;从制备样品匀液至样品接种完毕,全过程不得超过15 min;5.
7、3.2.2 初发酵试验每个样品,挑选 3个相宜的连续稀释度的样品匀液液体样品可以挑选原液, 每个稀释度接种 3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨LST肉汤,每管接种 1mL如接种量超过 1 mL,那么用双料 LST肉汤, 36 1 培育24 h 2 h ,观看倒管为否有气泡产生,24 h 2 h 产气者进展复发酵试验,如未产气那么连续培育至48 h 2 h ,产气者进展复发酵试验;未产气者为大肠菌群阴性;5.3.2.3 复发酵试验用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培育物1环,移种于煌绿乳糖胆盐肉汤BGLB管中, 36 1培育48 h 2 h ,观看产气情形;产气者,计为大肠-.可修编 - .第 5 页,
8、共 12 页 - - - - - - - - - -精品word 可编辑资料 - - - - - - - - - - - - -.菌群阳性管;5.3.2.4 大肠菌群最可能数MPN 的报告按5.3.2.3确证的大肠菌群 LST阳性管数, 检索MPN 表见附录 B,报告每 gmL样品肠菌群的 MPN值;5.4 大肠菌群平板计数法5.4.1 检验程序大肠菌群平板计数法的检验程序见图2;图2 大肠菌群平板计数法检验程序5.4.2 操作步骤5.4.2.1 样品的稀释-.可修编 - .第 6 页,共 12 页 - - - - - - - - - -精品word 可编辑资料 - - - - - - - -
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