细胞融合的方法过程和影响因素课件.ppt
![资源得分’ title=](/images/score_1.gif)
![资源得分’ title=](/images/score_1.gif)
![资源得分’ title=](/images/score_1.gif)
![资源得分’ title=](/images/score_1.gif)
![资源得分’ title=](/images/score_05.gif)
《细胞融合的方法过程和影响因素课件.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《细胞融合的方法过程和影响因素课件.ppt(46页珍藏版)》请在得力文库 - 分享文档赚钱的网站上搜索。
1、关于细胞融合的方法过程和影响因素现在学习的是第1页,共46页细胞融合概念融合方法融合过程融合的影响因素细胞融合现在学习的是第2页,共46页n细胞融合(细胞融合(cell fusioncell fusion):又称somatic hybridization or cell hybridization,指在自然条件下或人工方法使两个或两个以上的细胞通过无性方式融合形成一个杂合细胞的过程。它能重新组合两个亲本细胞的优良遗传信息,是研究细胞间遗传信息传递、基因在染色体定位、改良动物遗传特性及创造新的符合人类需要的新的细胞系极为有效的手段。自发融合:受精过程,成肌细胞融合,巨噬细胞融合,体外培养系统中的
2、细胞融合诱发融合一、细胞融合的概念现在学习的是第3页,共46页19621962年年OkataOkata发现仙台病毒可诱发艾氏腹水瘤细胞融合成多核细胞体,开创发现仙台病毒可诱发艾氏腹水瘤细胞融合成多核细胞体,开创动物细胞融合的暂新领域。动物细胞融合的暂新领域。现在学习的是第4页,共46页 Singer and Nicolsons Model of membrane structure:The fluid-mosaic model is the“central dogma”of membrane biology.A.The core lipid bilayer exists in a fluid
3、state,capable of dynamic movement.B.Membrane proteins form a mosaic of particles penetrating the lipid to varying degrees.The Fluid Mosaic Model,proposed in 1972 by Singer and Nicolson,had two key features,both implied in its name.现在学习的是第5页,共46页The chemical composition of membranesA.Membrane Lipids:
4、The Fluid Part of the Model Phospholipids:Phosphoglyceride磷酸甘油酯and sphingolipids Glycolipids Sterols(is only found in animals)vMembrane lipids are amphipathic.vThere are three major classes of lipids:现在学习的是第6页,共46页An Overview of membrane functions 1.Define the boundaries of the cell and its organell
5、es.2.Serve as loci for specific functions.3.provide for and regulate transport processes.4.contain the receptors needed to detect external signals.5.provide mechanisms for cell-to-cell contact,communication and adhesion现在学习的是第7页,共46页细胞融合机理细胞融合的关键:脂双层的接触靠近,细胞桥形成,胞质渗透细胞核融合。胆固醇磷脂糖脂寡糖疏水a螺旋鳌合蛋白极性孔蛋白分子Hyd
6、rophobic疏水的Hydrophilic亲水的现在学习的是第8页,共46页二、诱发细胞融合的方法病毒化学PEG电融合现在学习的是第9页,共46页1.病毒促进细胞融合病毒类融合剂是研究的最早的促融剂,一些致癌、致病病毒如疱疹病毒、天花病毒、副流感型病毒、副黏液病毒等,都能诱导细胞融合,但由于毒性大,应用上收到很大限制。n仙台病毒(HVJ)是一类被膜病毒,诱导细胞融合的不是仙台病毒内部的RNA,而是它的外膜它的外膜它的外膜它的外膜。n这一现象对你有何启示?现在学习的是第10页,共46页HVJ促融机制:当病毒位于两个细胞间时,病毒表面spike上神经氨酸酶降解细胞膜上的糖蛋白,使细胞膜局部聚集在
7、病毒周围,在高pH和Ca2+条件下局部细胞膜发生融合。现在学习的是第11页,共46页2.化学融合剂促进细胞融合1975年Kao和Chayluk报道PEG(polyethylene glycol,PEG)可促进细胞融合,Pontecorvo报道PEG促融效率高于仙台病毒100-300倍。PEG是一种多聚化合物,商品名卡波蜡Carbowax,分子量20020000,靠醚键的联结使其分子末端带弱负电荷,目前已衍生达50多种。现在学习的是第12页,共46页聚乙二醇(聚乙二醇(PEGPEG)介导的细胞融合)介导的细胞融合 原理:PEG带有大量的负电荷,和细胞膜表面的负电荷在Ca2的连接下,形成静电键,促
8、使异源的细胞膜间的粘着和结合,在高pH,高Ca2溶液的作用下,将Ca2和与质膜结合的PEG分子洗脱,导致电荷平衡失调并重新分配,使两种细胞膜上的正负电荷连接起来,进而形成具有共同质膜的融合体。现在学习的是第13页,共46页现在学习的是第14页,共46页现在学习的是第15页,共46页注意事项注意事项n1 PEG融合的关键是作用时间n2 PEG规格和纯度与融合效率有关n3 融合与细胞密度有关n4 融合液中加入少量CaCl2,即维持一定电导率,对细胞也有保护作用现在学习的是第16页,共46页3.电融合技术(Electroporation)现在学习的是第17页,共46页现在学习的是第18页,共46页现
9、在学习的是第19页,共46页3现在学习的是第20页,共46页注意事项n1)对介质要求高,一般用高纯度的蒸馏水并选用适当的非电介质溶液,如甘露醇等配制等渗性介质。n2)注意控制高频交流电压和直流脉冲电压的强度和时间,以防止细胞连接成串或发生可逆性降解。现在学习的是第21页,共46页融合参数:主要包括交流电压、交变电场的振幅频率、交变电场的处理时间;直流高频电压、脉冲宽度、脉冲次数等。现在学习的是第22页,共46页优点:优点:n融合率高,达7080,甚至100 融合率(融合组多核细胞的核数对照组多核细胞的核数/对照组的全部细胞数)100n可在显微镜下定向诱导细胞融合n可直接挑选杂种细胞现在学习的是
10、第23页,共46页n原理:原理:两种亲本细胞融合的混合物中可能有多种类型细胞,两种亲本细胞融合的混合物中可能有多种类型细胞,筛选的目的是获得优良的杂种细胞筛选的目的是获得优良的杂种细胞。n1 1)亲本)亲本 n 2 2)同核体)同核体homokaryon homokaryon:同源细胞融合体,它们的基因型和表现型完全:同源细胞融合体,它们的基因型和表现型完全一样。一样。n 3 3)异核体)异核体heterokaryon heterokaryon:异源细胞的融合体,它们含有双亲细胞核和:异源细胞的融合体,它们含有双亲细胞核和细胞质物质。细胞质物质。n 4 4)多核体:含有双亲不同比例核物质的融合
11、体)多核体:含有双亲不同比例核物质的融合体n 5 5)异胞质体:具有不同胞质来源的杂合细胞。)异胞质体:具有不同胞质来源的杂合细胞。n 6 6)核质体:有细胞核而带有少量细胞质的亚原生质体)核质体:有细胞核而带有少量细胞质的亚原生质体第二节融合细胞的筛选现在学习的是第24页,共46页动物细胞融合的筛选方式:n1 1)利用抗药性筛选系统利用抗药性筛选系统:利用生物细胞对:利用生物细胞对药物敏感性差异筛选杂种细胞。药物敏感性差异筛选杂种细胞。n亲本亲本A A:对氨苄青霉素敏感,对卡那霉素不:对氨苄青霉素敏感,对卡那霉素不敏感敏感n亲本亲本B B:对卡那霉素敏感,对氨苄青霉素不:对卡那霉素敏感,对氨
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 细胞融合 方法 过程 影响 因素 课件
![提示](https://www.deliwenku.com/images/bang_tan.gif)
限制150内