实验六网织红血小板计数精.ppt
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1、实验六六 网网织红 血小板血小板计数数第1页,本讲稿共19页Company Logo要求要求v熟悉网织红细胞染色的原理及形态学特点,掌握计熟悉网织红细胞染色的原理及形态学特点,掌握计数方法,了解注意事项和临床应用。数方法,了解注意事项和临床应用。v学会镜下辨认血小板的形态,掌握血小板计数的方学会镜下辨认血小板的形态,掌握血小板计数的方法和参考值,了解注意事项及临床应用。法和参考值,了解注意事项及临床应用。第2页,本讲稿共19页Company Logo红系祖细胞红系祖细胞红系祖细胞红系祖细胞 原红原红原红原红早幼红早幼红早幼红早幼红中幼红中幼红中幼红中幼红晚幼红晚幼红晚幼红晚幼红网织红网织红网织
2、红网织红红细胞红细胞红细胞红细胞 一、网织红细胞计数一、网织红细胞计数骨髓骨髓外周血外周血网织红细胞网织红细胞(reticulocyte,Ret)是有核红细胞转向无核到完全成熟红细胞的过)是有核红细胞转向无核到完全成熟红细胞的过度型细胞,其胞质中尚残留部分嗜碱性物质度型细胞,其胞质中尚残留部分嗜碱性物质(核糖体和核糖核酸核糖体和核糖核酸),能被煌焦油蓝、,能被煌焦油蓝、灿烂甲酚蓝、中性红等活体染料染色。根据网织红细胞的形态特征和成熟程度将灿烂甲酚蓝、中性红等活体染料染色。根据网织红细胞的形态特征和成熟程度将其分为四型:其分为四型:I型型(丝球型丝球型),沉淀颗粒呈致密结块的网织红细胞;,沉淀颗
3、粒呈致密结块的网织红细胞;型型(网型网型),沉淀颗粒呈疏松结构;,沉淀颗粒呈疏松结构;型型(破网型破网型),沉淀颗粒呈散在结构;,沉淀颗粒呈散在结构;在外周血中仅占在外周血中仅占0.15%型型(点粒型点粒型),沉淀颗粒呈少数散在分布。多见于外周血,沉淀颗粒呈少数散在分布。多见于外周血,60%以上以上第3页,本讲稿共19页Company Logo第4页,本讲稿共19页Company Logo(一一)染色原理染色原理 网织红细胞内网织红细胞内RNA的磷酸基(带负电荷)能与溴甲酚的磷酸基(带负电荷)能与溴甲酚蓝、新亚甲蓝等碱性染料的有色反应基(带正点荷)结蓝、新亚甲蓝等碱性染料的有色反应基(带正点荷
4、)结合,形成核酸与碱性染料复合物的蓝黑色多聚颗粒,其合,形成核酸与碱性染料复合物的蓝黑色多聚颗粒,其颗粒又联缀成线状甚至网状。凡含有两个以上深染颗粒颗粒又联缀成线状甚至网状。凡含有两个以上深染颗粒(或具有线网状结构)的无核红细胞,即为网织红细胞。(或具有线网状结构)的无核红细胞,即为网织红细胞。第5页,本讲稿共19页Company Logo(二二)试剂试剂煌焦油蓝染液(煌焦油蓝染液(1%)v煌焦油蓝煌焦油蓝 1gv枸橼酸钠枸橼酸钠 0.4gv氯化钠氯化钠 0.85gv蒸馏水加到蒸馏水加到100ml,充分溶解过滤备用。,充分溶解过滤备用。第6页,本讲稿共19页Company Logo(三)操作(
5、三)操作 显微镜计数法显微镜计数法 2d染料染料+2d全血(全血(1:1)混匀后染)混匀后染15min,倾少许玻片上,制备薄膜片,倾少许玻片上,制备薄膜片,晃动玻片使迅速干燥,低倍镜浏览全片,选细胞分布均匀无重叠染色良好部晃动玻片使迅速干燥,低倍镜浏览全片,选细胞分布均匀无重叠染色良好部位,油镜下观察位,油镜下观察1000个红细胞中网织红细胞数目。个红细胞中网织红细胞数目。v参考范围参考范围 成成 人:人:0.0080.02 新生儿:新生儿:0.020.06其它方法:其它方法:v网织红细胞计数仪网织红细胞计数仪v荧光激活细胞术荧光激活细胞术v流式细胞术流式细胞术第7页,本讲稿共19页Compa
6、ny Logo第8页,本讲稿共19页Company Logo(四)注意事项(四)注意事项v1、红细胞必须含两个或两个以上蓝色颗粒,且无需微调显微镜即可见。颗、红细胞必须含两个或两个以上蓝色颗粒,且无需微调显微镜即可见。颗粒必须远离细胞边缘,以免与变性珠蛋白小体混淆。粒必须远离细胞边缘,以免与变性珠蛋白小体混淆。v2、染色时间必须充分,当室温较低时,需适当延长染色时间或置、染色时间必须充分,当室温较低时,需适当延长染色时间或置37水浴箱内水浴箱内。v3、制片应厚薄适宜,否则会造成网织红细胞分布不均。、制片应厚薄适宜,否则会造成网织红细胞分布不均。v4、网织红细胞体积较大,常在血膜尾部和两侧较多,
7、计数应该兼顾。、网织红细胞体积较大,常在血膜尾部和两侧较多,计数应该兼顾。v5、复染会使网织红数值降低,因此不采用瑞氏染料复染,用二甲苯擦涂片、复染会使网织红数值降低,因此不采用瑞氏染料复染,用二甲苯擦涂片也会使结果降低。也会使结果降低。v6、染料配制必须祛除沉渣。、染料配制必须祛除沉渣。第9页,本讲稿共19页Company Logo方法学评价方法学评价显微镜法显微镜法v可直接观察细胞形态,不需特殊仪器,其中试管法操作简便,重复性较好,被列为手工可直接观察细胞形态,不需特殊仪器,其中试管法操作简便,重复性较好,被列为手工网织红细胞计数的参考方法网织红细胞计数的参考方法v但工作效率不高,实验精密
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