实验十PEG法诱导鸡血细胞融合.ppt
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1、实验实验 十十 PEGPEG法诱导鸡血细胞融合法诱导鸡血细胞融合College of Life Science and Technology,XINJIANG Univercity一、实验目的一、实验目的n了了解聚乙二醇(解聚乙二醇(PEGPEG)诱导体外细胞融合诱导体外细胞融合的基本原理。的基本原理。n通过通过PEGPEG诱导鸡血细胞之间的融合实验诱导鸡血细胞之间的融合实验,初步掌握细胞融合的基本方法。初步掌握细胞融合的基本方法。二、实验原理二、实验原理n细胞融合(细胞融合(cell fusioncell fusion)又称又称体细胞杂交体细胞杂交,是指用,是指用人工方法使两个或两个以上的体
2、细胞融合成异核体人工方法使两个或两个以上的体细胞融合成异核体细胞,随后,异核体同步进入有丝分裂,核膜崩溃,细胞,随后,异核体同步进入有丝分裂,核膜崩溃,来自两个亲本细胞的基因组合在一起形成只含有一来自两个亲本细胞的基因组合在一起形成只含有一个细胞核的杂种细胞(个细胞核的杂种细胞(hybrid cellhybrid cell)。)。n细胞融合技术是研究细胞遗传、基因定位、细胞免细胞融合技术是研究细胞遗传、基因定位、细胞免疫、病毒和肿瘤的重要手段。依据融合过程采用的疫、病毒和肿瘤的重要手段。依据融合过程采用的助融剂助融剂的不同,细胞融合可分为:的不同,细胞融合可分为:病毒诱导的细胞病毒诱导的细胞融
3、合,如仙台病毒融合,如仙台病毒(hemagglutinating virus of(hemagglutinating virus of Japan,HVJ);Japan,HVJ);化学因子诱导的细胞融合,如聚乙二醇化学因子诱导的细胞融合,如聚乙二醇(polyethyleneglycol,PEGpolyethyleneglycol,PEG);电场诱导的细胞融电场诱导的细胞融合;激光诱导的细胞融合。合;激光诱导的细胞融合。聚乙二醇分子能改变各类细胞的膜结构,使两细胞聚乙二醇分子能改变各类细胞的膜结构,使两细胞 接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组,由于接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组,由于 两
4、细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此 的表面张力作用,使细胞发生融合。的表面张力作用,使细胞发生融合。细胞融合的频率和活力与所用细胞融合的频率和活力与所用PEGPEG分子质量、浓度、分子质量、浓度、作用时间、细胞的生理状态与密度等有关。作用时间、细胞的生理状态与密度等有关。骨髓间质充质干细胞移植后的细胞融合骨髓间质充质干细胞移植后的细胞融合荧光标记的细胞融合荧光标记的细胞融合三实验仪器、材料和试剂三实验仪器、材料和试剂n仪器、用具:注射器、刻度离心管、离心仪器、用具:注射器、刻度离心管、离心机、血细胞记数板、水浴锅、滴管、显微机、血细胞记数板、水浴
5、锅、滴管、显微镜、烧杯、容量瓶、凹面载玻片、盖玻片、镜、烧杯、容量瓶、凹面载玻片、盖玻片、酒精灯等。酒精灯等。n材料:成年家鸡。材料:成年家鸡。(1)0.85%NaCl溶液溶液:(2)GKN液:液:8.0gNaCl,0.4gKCl,1.77gNa2HPO42H2O,0.69gNaH2PO4H2O,2.0g葡萄糖,葡萄糖,0.01g酚红,溶于酚红,溶于1000ml重蒸水中。重蒸水中。(3)50%(m/v)PEG溶液:溶液:取取50gPEG(相对分子量相对分子量=4000)放放入入100ml瓶中,高压灭菌瓶中,高压灭菌20min。让。让PEG冷却至冷却至50-60,勿让其凝固。加入勿让其凝固。加入
6、50ml预热至预热至50的的GKN液,混匀,置液,混匀,置37备用。备用。(4)Hanks原液原液(10):NaCl80.0g;Na2HPO412H2O1.2g;KCl4.0g;KH2PO40.6g;MgSO47H2O2.0g;葡萄糖葡萄糖10.0g;CaCl21.4g。试剂试剂 称取称取1.4g1.4g的的CaCl2CaCl2,融于,融于30-50ml30-50ml的重蒸水中。取的重蒸水中。取1000ml1000ml的烧杯及容量瓶各一个,先放重蒸水的烧杯及容量瓶各一个,先放重蒸水800ml800ml于烧于烧杯中,然后按上述配方顺序,逐一称取药品。必须在前杯中,然后按上述配方顺序,逐一称取药品
7、。必须在前一药品完全溶解后,方可加入下一药品,直到葡萄糖完一药品完全溶解后,方可加入下一药品,直到葡萄糖完全溶解后,再将已溶解的全溶解后,再将已溶解的CaClCaCl2 2溶液加入,最后加水至溶液加入,最后加水至1000ml1000ml。(6 6)HanksHanks液:液:HanksHanks原液原液100 ml100 ml,加重蒸水,加重蒸水896 ml896 ml,加加0.5%0.5%酚红酚红 4 ml 4 ml。配好的。配好的HanksHanks液,分装包扎好液,分装包扎好 贴上标签,经过灭菌后,贴上标签,经过灭菌后,44保存。保存。(7 7)詹纳斯绿染液。)詹纳斯绿染液。(一)鸡血细
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- 关 键 词:
- 实验 PEG 诱导 血细胞 融合
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