清华仪器分析课件--第三章--高效液相色谱分析法-HPLC复习进程.ppt
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1、清华仪器分析课件-第三章-高效液相色谱分析法-HPLC2 2 2 2流动相差别的区别流动相差别的区别流动相差别的区别流动相差别的区别GCGC:流动相为惰性,气体组分与流动相无亲合作用:流动相为惰性,气体组分与流动相无亲合作用 力,只与固定相有相互作用。力,只与固定相有相互作用。HPLCHPLC:流动相为液体,流动相与组分间有亲合作用:流动相为液体,流动相与组分间有亲合作用 力,能提高柱的选择性、改善分离度,对分离起力,能提高柱的选择性、改善分离度,对分离起 正向作用。且流动相种类较多,选择余地广,改正向作用。且流动相种类较多,选择余地广,改 变流动相极性和变流动相极性和pHpH值也对分离起到调
2、控作用,当值也对分离起到调控作用,当 选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相 也可以增大分离选择性。也可以增大分离选择性。3 3 3 3操作条件差别操作条件差别操作条件差别操作条件差别GCGC:加温操作:加温操作HPLCHPLC:室温;高压(液体粘度大,峰展宽小):室温;高压(液体粘度大,峰展宽小)1 1贮液罐(滤棒,可滤贮液罐(滤棒,可滤贮液罐(滤棒,可滤贮液罐(滤棒,可滤 去颗粒状物质)去颗粒状物质)去颗粒状物质)去颗粒状物质)2 2高压泵(输液泵)高压泵(输液泵)高压泵(输液泵)高压泵(输液泵)3 3进样装置进样装置进样装置进样装置4 4色谱
3、柱色谱柱色谱柱色谱柱分离分离分离分离5 5检测器检测器检测器检测器分析分析分析分析6 6废液出口或组分收集器废液出口或组分收集器废液出口或组分收集器废液出口或组分收集器 7 7记录装置记录装置记录装置记录装置n n二、高效液相色谱仪流程图二、高效液相色谱仪流程图三、三、HPLC的特点和实际应用的特点和实际应用1 1、利用其高柱效(、利用其高柱效(n=10n=104 4片片/米),有效分离极复杂米),有效分离极复杂 体系中的痕量组分。体系中的痕量组分。正相色谱分离有机溶剂中的物质正相色谱分离有机溶剂中的物质 反相色谱分离水溶液中的物质反相色谱分离水溶液中的物质-生化物质。生化物质。2 2、用离子
4、型固定相建立的离子交换色谱和离子对、用离子型固定相建立的离子交换色谱和离子对 色谱法分析离子型体的含量。(蛋白质、氨色谱法分析离子型体的含量。(蛋白质、氨 基酸、常见阴阳离子等)基酸、常见阴阳离子等)3 3、利用多孔凝胶固定相建立空间排阻色谱法可分、利用多孔凝胶固定相建立空间排阻色谱法可分 离高分子化合物。离高分子化合物。4 4、利用手性固定相可以拆分分离具有手性的化、利用手性固定相可以拆分分离具有手性的化 合物。合物。2-2 2-2 基本理论和条件选择基本理论和条件选择基础基础理论理论n n热力学理论:塔板理论平衡理论n n动力学理论:速率理论Vander方程一、塔板理论一、塔板理论1.1.
5、二、速率理论(与二、速率理论(与GCGC对比)对比)2 2)涡流扩散项及其影响)涡流扩散项及其影响2.2.讨论:讨论:讨论:讨论:1 1)流动相流速对)流动相流速对HPLCHPLC板高的影响(与板高的影响(与GCGC对比)对比)3 3)传质阻抗项及其影响)传质阻抗项及其影响 1 1三、三、影响分离的因素影响分离的因素1.固定相与装柱方法的选择:选粒径小的、分布均匀的球形固定相 (dp10m)首选化学键合相,匀浆法装柱2.流动相及其流速的选择:选粘度小、低流速的流动相甲醇,约1ml/min 3.柱温的选择:选室温250C左右四、四、HPLCHPLC法中分离条件的选择法中分离条件的选择一、液固吸附
6、色谱法(LSC)(liquid-solid adsorption chromatography)二、液液分配色谱法(LLC)(liquid-liquid partition chromatography,chemical bonded phase chromatography三、离子色谱法(IC)(ion-exchange chromatography and ion pair chromatography)四、空间排阻色谱法(SEC)(steric exclusion chromatography2-32-3 各类高效液相色谱法简介各类高效液相色谱法简介1 1分离机制:利用溶质分子占据固定相
7、表面吸附分离机制:利用溶质分子占据固定相表面吸附 活性中心能力的差异活性中心能力的差异 分离前提:K不等或k不等一、液固吸附色谱法(一、液固吸附色谱法(LSC)流动相为液体,固定相为固体吸附剂流动相为液体,固定相为固体吸附剂2 2固定相:与固定相:与LCLC比,固定相粒径不同(比,固定相粒径不同(1017%17%分配色谱分配色谱 硅胶失活硅胶失活载体载体 吸附的水吸附的水固定液固定液1 1分离机制:利用组分在两相中溶解度的差异分离机制:利用组分在两相中溶解度的差异2 2固定相:载体固定相:载体+固定液(物理或机械涂渍法)固定液(物理或机械涂渍法)缺点:系统内部压力大,易流失,不实用缺点:系统内
8、部压力大,易流失,不实用 固定液固定液极性极性NLLCNLLC 固定液固定液非极性非极性RLLCRLLC3 3正相色谱正相色谱正相色谱正相色谱固定液极性固定液极性固定液极性固定液极性 流动相极性流动相极性流动相极性流动相极性(NLLCNLLC)极性小的组分先出柱,极性大的组分后出柱极性小的组分先出柱,极性大的组分后出柱极性小的组分先出柱,极性大的组分后出柱极性小的组分先出柱,极性大的组分后出柱 适于分离极性组分适于分离极性组分适于分离极性组分适于分离极性组分 反相色谱反相色谱反相色谱反相色谱固定液极性固定液极性固定液极性固定液极性 固定相极性固定相极性 底剂底剂+有机调节剂(极性调节剂)有机调
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- 清华 仪器 分析 课件 第三 高效 色谱 HPLC 复习 进程
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