诊断病理学复习说课材料.ppt
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1、诊断病理学复习诊断病理学概念诊断病理学概念v病理诊断:病理诊断:泛指应用病理学理论和技术,泛指应用病理学理论和技术,对取自机体内生前或死后的病变组织、细对取自机体内生前或死后的病变组织、细胞进行形态学观察、分析作出的疾病诊断胞进行形态学观察、分析作出的疾病诊断v诊断病理学(外科病理学):诊断病理学(外科病理学):指临床上由指临床上由于诊断和治疗的需要,对取自病人活体内于诊断和治疗的需要,对取自病人活体内的病变组织、细胞,进行病理诊断的一门的病变组织、细胞,进行病理诊断的一门医疗实践科学病理学的一个分支医疗实践科学病理学的一个分支诊断病理学的任务诊断病理学的任务v确定疾病的诊断确定疾病的诊断v为
2、临床选择治疗方案提供依据为临床选择治疗方案提供依据v提供疾病的严重程度和预后的信息提供疾病的严重程度和预后的信息v帮助临床判定病情取向及疗效帮助临床判定病情取向及疗效v为科学研究积累宝贵的资料、发现新病种等为科学研究积累宝贵的资料、发现新病种等诊断病理学的检查方法及评价诊断病理学的检查方法及评价v活体组织检查活体组织检查术前活检:创伤小,绝大多数能帮助临床确诊术前活检:创伤小,绝大多数能帮助临床确诊术中活检:确定病变性质、了解病变、确定所取标术中活检:确定病变性质、了解病变、确定所取标本是否含有预定的组织器官或病变本是否含有预定的组织器官或病变术后活检:检查全面、细致,诊断更可靠术后活检:检查
3、全面、细致,诊断更可靠v细胞学检查细胞学检查通过对患者病变部位脱落、刮取和穿刺抽取的通过对患者病变部位脱落、刮取和穿刺抽取的细胞进行病理形态学观察,作出定性诊断。目前主细胞进行病理形态学观察,作出定性诊断。目前主要应用于肿瘤诊断要应用于肿瘤诊断临床医生如何应用诊断病理学临床医生如何应用诊断病理学v正确选用诊断病理学检查种类正确选用诊断病理学检查种类v按照诊断病理学的规范要求送检按照诊断病理学的规范要求送检v临床与病理医生应密切合作临床与病理医生应密切合作v临床病理讨论会(临床病理讨论会(clinicalpathologicalconference,CPC):是临床和病理共同对临床死亡是临床和病
4、理共同对临床死亡病例的尸检结果与生前诊断及治疗进行对比分析的病例的尸检结果与生前诊断及治疗进行对比分析的专题学术会议专题学术会议v外科病理讨论会(外科病理讨论会(surgicalpathologicalconference,SPC):是手术科室的临床医生与病理是手术科室的临床医生与病理医生对疑难活检病理进行的小型医生对疑难活检病理进行的小型CPC病理学常用研究方法病理学常用研究方法v研究组织与细胞显微结构和超微结构的化学组成及研究组织与细胞显微结构和超微结构的化学组成及其定位的科学其定位的科学v研究对象研究对象是生物大分子:核酸、蛋白质、酶、多糖是生物大分子:核酸、蛋白质、酶、多糖和脂类等和脂
5、类等v原理:原理:细胞中化学成分及其相应的底物呈一系列的细胞中化学成分及其相应的底物呈一系列的化学反应,形成在显微镜下可见到的反应产物化学反应,形成在显微镜下可见到的反应产物组织与细胞化学技术组织与细胞化学技术常用的染色常用的染色v孚尔根反应法(孚尔根反应法(feulgenreaction):):显示显示DNA呈紫红色呈紫红色v甲绿派郎宁法:甲绿派郎宁法:显示核酸(甲绿染显示核酸(甲绿染DNA呈绿色,呈绿色,派郎宁染派郎宁染RNA呈红色)呈红色)v苏丹苏丹冰冻切片染色:冰冻切片染色:显示中性脂肪呈橘红色显示中性脂肪呈橘红色v普鲁士蓝反应:普鲁士蓝反应:显示组织中的含铁血黄素显示组织中的含铁血黄
6、素v嗜银染色:嗜银染色:显示弹力纤维、基底膜、尼氏小体和神显示弹力纤维、基底膜、尼氏小体和神经纤维经纤维v过碘酸雪夫反应(过碘酸雪夫反应(PAS):):显示糖原和多糖物质为紫红色显示糖原和多糖物质为紫红色免疫组织化学免疫组织化学v免疫学原理:应用抗原与抗体接触后可形成免疫学原理:应用抗原与抗体接触后可形成“抗原抗体复合物抗原抗体复合物”的化学反应,以检测的化学反应,以检测组织或细胞内抗原(或抗体)的技术组织或细胞内抗原(或抗体)的技术染色过程中需注意的事项染色过程中需注意的事项v阳性细胞首先符合下列标准:阳性细胞首先符合下列标准:1.切片染色对比度好,背景清晰切片染色对比度好,背景清晰2.阳性
7、细胞定位要准确阳性细胞定位要准确3.出血、坏死、受挤压的组织及切片边缘出血、坏死、受挤压的组织及切片边缘不应作为判断的依据不应作为判断的依据 染色过程中需注意的事项染色过程中需注意的事项v正确设置对照正确设置对照1.阴性对照:阴性对照:空白对照空白对照PBS置换第一抗体置换第一抗体替代对照用同种动物的正常血清代替第一抗体替代对照用同种动物的正常血清代替第一抗体2.阳性对照:阳性对照:用已知或已被实验证明为阳性的组织用已知或已被实验证明为阳性的组织3.自身对照:自身对照:利用组织切片内的各种不同的组织成分作对照利用组织切片内的各种不同的组织成分作对照 参考判断标准参考判断标准 1.1.首先将染色
8、强度打分:首先将染色强度打分:0 0分为无色分为无色1 1分为淡黄色分为淡黄色2 2分为棕黄色分为棕黄色3 3分为棕褐色分为棕褐色2.2.再将阳性细胞所占的百分比打分:再将阳性细胞所占的百分比打分:O O分为阴性分为阴性1 1分为阳性细胞分为阳性细胞10102 2分为分为11115050 3 3分为分为5151-75-754 4分为分为7575染色深浅需与背染色深浅需与背景着色相对比景着色相对比染色强度染色强度与阳性细与阳性细胞百分比胞百分比的乘积的乘积33分才算免分才算免疫反应疫反应(+)(+)电子显微镜技术电子显微镜技术v透射式电镜:观察细胞内部的微细结构透射式电镜:观察细胞内部的微细结构
9、v扫描电镜:能直接观察样品的表面结构扫描电镜:能直接观察样品的表面结构癌细胞奇异形核癌细胞扫描电镜图共聚焦激光扫描显微镜技术共聚焦激光扫描显微镜技术v细胞组织光学切片:细胞细胞组织光学切片:细胞CT或显微或显微CTv三维图像重建三维图像重建v对活细胞的动态观察对活细胞的动态观察v细胞内细胞内PH及细胞离子的定量测定及细胞离子的定量测定v细胞间通讯的研究细胞间通讯的研究v细胞膜流动性测定细胞膜流动性测定体外培养神经细胞体外培养神经细胞花粉颗粒三维图像花粉颗粒三维图像神经细胞神经细胞DNA含量荧光强度图含量荧光强度图生物芯片生物芯片v生物芯片是借鉴计算机对生物信号进行平行生物芯片是借鉴计算机对生物
10、信号进行平行分析,利用微点阵技术将成千上万个生物信分析,利用微点阵技术将成千上万个生物信息密码集中到一小片固相基质上,快速完成息密码集中到一小片固相基质上,快速完成对生物信号分析的一项技术对生物信号分析的一项技术 v常用芯片:常用芯片:基因芯片基因芯片蛋白芯片蛋白芯片组织芯片组织芯片显微切割技术显微切割技术v是在显微镜下用手工或仪器采样的方法从细是在显微镜下用手工或仪器采样的方法从细胞切片或细胞涂片上将所要研究的形态或表胞切片或细胞涂片上将所要研究的形态或表型相同的细胞从组织三维结构中分离出来,型相同的细胞从组织三维结构中分离出来,获得纯的细胞群,以备进一步作分子水平的获得纯的细胞群,以备进一
11、步作分子水平的研究研究u 原位杂交原位杂交(in situ hybridization,ISH)(in situ hybridization,ISH)是应用已知碱是应用已知碱基顺序并带有标记物的核酸探针与组织、细胞中待检测的基顺序并带有标记物的核酸探针与组织、细胞中待检测的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合而形成杂交体,然核酸按碱基配对的原则进行特异性结合而形成杂交体,然后再用与标记物相应的检测系统,在被检测的核酸原位形后再用与标记物相应的检测系统,在被检测的核酸原位形成有色的杂交信号,在显微镜下进行细胞内定位成有色的杂交信号,在显微镜下进行细胞内定位u 将分子杂交与组织化学将分子杂交与组织化
12、学(细胞化学细胞化学)或免疫组织化学相结或免疫组织化学相结合的一项技术合的一项技术 原位分子杂交原位分子杂交u流式细胞分析技术是一种单细胞定量分析和分选的新技术流式细胞分析技术是一种单细胞定量分析和分选的新技术u检测范围包括检测范围包括细胞表面或细胞内的各种抗原、蛋白、酶、基因表达产细胞表面或细胞内的各种抗原、蛋白、酶、基因表达产物检测物检测细胞内的核酸定量、细胞内的核酸定量、DNADNA倍体、细胞周期分析倍体、细胞周期分析癌基因检测、血细胞表型分析、细胞因子和粘附分子的癌基因检测、血细胞表型分析、细胞因子和粘附分子的检测、细胞凋亡检测等检测、细胞凋亡检测等 流式细胞术流式细胞术多聚酶链式反应
13、技术多聚酶链式反应技术PCRu原理:是一个在模板原理:是一个在模板DNA、引物(模板片段、引物(模板片段两端的已知序列)和四种脱氧核苷酸等存在两端的已知序列)和四种脱氧核苷酸等存在的情况下,的情况下,DNA聚合酶依赖的酶促合成反应聚合酶依赖的酶促合成反应u整个扩增分三步:整个扩增分三步:1.1.变性:变性:加热使模板加热使模板DNADNA双链间的氢键双链间的氢键断裂而形成两条单链;断裂而形成两条单链;2.2.退火:退火:降温后模板降温后模板DNADNA与引物按与引物按碱基配对原则互补结合;碱基配对原则互补结合;3.3.延伸:延伸:在在DNADNA聚合酶及镁离子聚合酶及镁离子等存在的条件下,从引
14、物的等存在的条件下,从引物的33端开始,结合单核苷酸,形端开始,结合单核苷酸,形成与模板链互补的新成与模板链互补的新DNADNA链链 u其它几种其它几种PCRPCR技术:技术:1.1.定量定量PCRPCR;2.2.原位原位PCRPCR;3.3.逆转录逆转录PCRPCR(RTRTPCRPCR)食管癌食管癌v发病情况:发病情况:我国高发,我国高发,4040岁以上中年男性岁以上中年男性v病因和发病机制:病因和发病机制:1.1.环境因素:微量元素缺乏环境因素:微量元素缺乏 2.2.饮食因素:发酵霉变食物饮食因素:发酵霉变食物 3.3.病毒感染:病毒感染:HPVHPVv好发部位:好发部位:食管中段多见食
15、管中段多见病理变化及临床联系:病理变化及临床联系:1.1.早期癌:早期癌:a.a.概念:粘膜及粘膜下层,无淋巴结转移概念:粘膜及粘膜下层,无淋巴结转移 b.b.形态形态:无明显肿块(隐伏型、糜烂型、斑块型、无明显肿块(隐伏型、糜烂型、斑块型、乳头型)乳头型)c.c.临床:无明显症状。钡餐检查食管基本正常或临床:无明显症状。钡餐检查食管基本正常或 管壁轻度局限性僵硬管壁轻度局限性僵硬d.d.预后:术后预后:术后5 5年存活率在年存活率在90%90%以上,预后较好以上,预后较好 2.2.中、晚期癌:中、晚期癌:a.a.形态:蕈伞型,溃疡型,髓质型,缩窄型形态:蕈伞型,溃疡型,髓质型,缩窄型b.b.
16、组织学类型:组织学类型:鳞癌,腺癌,腺鳞癌,鳞癌,腺癌,腺鳞癌,小细胞癌等小细胞癌等c.c.临床:进行性吞咽困难临床:进行性吞咽困难v扩散:扩散:1.1.淋巴道转移:淋巴道转移:黏膜内癌的淋巴结转移率约黏膜内癌的淋巴结转移率约5%5%浸润至黏膜下层癌的淋巴结转移率浸润至黏膜下层癌的淋巴结转移率30%侵犯邻近器官或组织的癌淋巴结转移率侵犯邻近器官或组织的癌淋巴结转移率80%上段颈部、上纵隔淋巴结上段颈部、上纵隔淋巴结中段纵隔、颈部淋巴结中段纵隔、颈部淋巴结下段食管旁、腹腔上淋巴结下段食管旁、腹腔上淋巴结 v扩散:扩散:2.2.直接蔓延:直接蔓延:上段癌侵入喉部、气管和颈部软组织上段癌侵入喉部、气
17、管和颈部软组织中段癌多侵入支气管、肺中段癌多侵入支气管、肺下段癌常侵入贲门、膈、心包等下段癌常侵入贲门、膈、心包等处处3.3.血道转移:血道转移:以肝、肺最常见以肝、肺最常见v食管癌早期诊断:食管癌早期诊断:食管拉网脱落细胞学检查食管拉网脱落细胞学检查 食管镜食管镜 钡餐透视钡餐透视v遗传学遗传学食管鳞状细胞癌(食管鳞状细胞癌(SCCSCC)1.1.食管炎食管炎 低级别上皮内肿瘤:低级别上皮内肿瘤:P53P53突变突变2.2.低级别低级别 高级别上皮内肿瘤:高级别上皮内肿瘤:P53P53突变、突变、FHITFHIT基因缺失基因缺失3.3.高级别上皮内肿瘤高级别上皮内肿瘤 浸润型癌:浸润型癌:C
18、yclin D1Cyclin D1过表达、过表达、EGFREGFR扩增、扩增、c-mycc-myc扩增扩增胃粘膜疾病的分子病理学胃粘膜疾病的分子病理学胃粘膜缺血、缺氧、化学药物损伤、胃粘膜缺血、缺氧、化学药物损伤、神经体液调节异常和细菌感染等均可引神经体液调节异常和细菌感染等均可引起粘膜上皮细胞损伤、胃粘膜屏障破坏起粘膜上皮细胞损伤、胃粘膜屏障破坏及粘膜保护因子的减少(表皮生长因子、及粘膜保护因子的减少(表皮生长因子、前列腺素和多巴胺等)前列腺素和多巴胺等)前列腺素水平降低为胃粘膜疾病的前列腺素水平降低为胃粘膜疾病的重要因素重要因素v胃粘膜自身能合成多种前列腺素胃粘膜自身能合成多种前列腺素v前
19、列腺素能够保护粘膜免受有害物质的侵袭,前列腺素能够保护粘膜免受有害物质的侵袭,减少非甾体类抗炎药物所致的粘膜损伤减少非甾体类抗炎药物所致的粘膜损伤v生长抑素、神经降压素和脑啡肽等通过刺激生长抑素、神经降压素和脑啡肽等通过刺激前列腺素的生成而实现保护细胞的作用前列腺素的生成而实现保护细胞的作用v补充外源性前列腺素有保护和治疗胃粘膜病补充外源性前列腺素有保护和治疗胃粘膜病变的作用变的作用幽门螺杆菌感染为胃粘膜疾病的幽门螺杆菌感染为胃粘膜疾病的另一重要因素另一重要因素vHp与慢性胃炎、消化型溃疡、胃癌、胃食管反与慢性胃炎、消化型溃疡、胃癌、胃食管反流病等有关流病等有关vHp致病机制:致病机制:1.动
20、力因素:动力因素:动力强的动力强的Hp菌株致病力强并能产菌株致病力强并能产生空泡毒素,动力弱的致病力弱也不产生空泡生空泡毒素,动力弱的致病力弱也不产生空泡毒素毒素2.粘附作用:粘附作用:Hp具有较强的嗜组织性,一旦具有较强的嗜组织性,一旦穿过粘膜层,就特异的粘附并定居在胃粘膜上穿过粘膜层,就特异的粘附并定居在胃粘膜上皮细胞表面,胃窦部多见(粘附分泌细胞)皮细胞表面,胃窦部多见(粘附分泌细胞)3.Hp的尿素酶:的尿素酶:对对Hp的生存起重要作用。可的生存起重要作用。可催化尿素分解为氨和催化尿素分解为氨和CO2,氨中和氨中和Hp周围的胃周围的胃酸,对酸,对Hp起保护作用;氨能降低粘液中粘蛋起保护作
21、用;氨能降低粘液中粘蛋白的含量,削弱屏障功能白的含量,削弱屏障功能4.脂多糖(脂多糖(LPS):):Hp产生的产生的LPS能抑制层连能抑制层连蛋白与其受体的结合蛋白与其受体的结合5.空泡毒素(空泡毒素(VacA):):引起细胞空泡化引起细胞空泡化6.细胞毒素相关蛋白(细胞毒素相关蛋白(CagA):):所有的所有的Hp均均有有VacA基因,但只有基因,但只有60%的的Hp有有CagA。CagA基因仅出现于基因仅出现于VacA产生细胞毒效应时产生细胞毒效应时肠上皮化生肠上皮化生v胃粘膜上皮被肠型上皮所代替胃粘膜上皮被肠型上皮所代替v以肠化占胃粘膜比例分三级以肠化占胃粘膜比例分三级轻:轻:1/3以下
22、中:以下中:2/3以下重:以下重:2/3以上以上v类型:根据肠化细胞形态及分泌粘液性质类型:根据肠化细胞形态及分泌粘液性质小肠型、结肠型,完全性、不完全性小肠型、结肠型,完全性、不完全性v正常胃粘膜:正常胃粘膜:中性粘液中性粘液小肠小肠:唾液酸粘液唾液酸粘液结肠结肠:硫酸粘液硫酸粘液v小肠型完全肠化:小肠型完全肠化:由小肠吸收细胞、杯状细由小肠吸收细胞、杯状细胞、胞、Paneth细胞组成细胞组成v小肠型不完全肠化:小肠型不完全肠化:由粘液柱状细胞、杯状由粘液柱状细胞、杯状细胞组成,无成熟吸收细胞、细胞组成,无成熟吸收细胞、Paneth细胞细胞v大肠型完全肠化:大肠型完全肠化:由大肠吸收细胞、杯
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