食品中菌落总数测定精.ppt
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1、食品中菌落食品中菌落总数数测定定第1页,本讲稿共16页Contents实验目的实验目的 实验器材实验器材 培养基、试剂和样品培养基、试剂和样品实验进度表实验进度表 12345 实验步骤第2页,本讲稿共16页实验目的实验目的掌握食品中菌落总数测定的基本程序和要点。掌握食品中菌落总数测定的基本程序和要点。学会对不同样品稀释度确定的原则。学会对不同样品稀释度确定的原则。第3页,本讲稿共16页实验器材实验器材 电子天平(感量电子天平(感量0.1g)、量筒)、量筒500ml、振荡器、振荡器、恒温培养箱(恒温培养箱(36 1 )、)、恒温水浴箱(恒温水浴箱(46 1)、无菌吸管:)、无菌吸管:2支支10
2、mL(具(具0.1 mL 刻度)、无菌锥形瓶:容量刻度)、无菌锥形瓶:容量500 mL、无菌培养无菌培养皿:皿:6只直径只直径90 mm、pH 计或计或pH 比色管或精比色管或精密密pH 试纸、稀释试管:试纸、稀释试管:6支支18mm180mm、放大镜放大镜 第4页,本讲稿共16页培养基、试剂和样品培养基、试剂和样品平板计数琼脂(平板计数琼脂(plate count agar,PCA)培养基)培养基A.1.1 成分成分胰蛋白胨胰蛋白胨 5.0 g酵母浸膏酵母浸膏 2.5 g葡萄糖葡萄糖 1.0 g琼琼 脂脂 15.0 g蒸馏水蒸馏水 1000 mLpH 7.00.2A.1.2 制法制法将上述成
3、分加于蒸馏水中,煮沸溶解,调节将上述成分加于蒸馏水中,煮沸溶解,调节pH。分装试管或锥形瓶,。分装试管或锥形瓶,121 高压灭菌高压灭菌15 min 第5页,本讲稿共16页培养基、试剂和样品培养基、试剂和样品磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液A.2.1 成分成分磷酸二氢钾(磷酸二氢钾(KH2PO4)34.0 g蒸馏水蒸馏水 500 mLpH 7.2A.2.2 制法制法贮存液:称取贮存液:称取34.0 g的磷酸二氢钾溶于的磷酸二氢钾溶于500 mL蒸馏蒸馏水中,用大约水中,用大约175 mL的的1 mol/L氢氧化钠溶液调节氢氧化钠溶液调节pH,用蒸馏水稀释至,用蒸馏水稀释至1 000 mL后贮存于冰箱。
4、后贮存于冰箱。稀释液:取贮存液稀释液:取贮存液1.25 mL,用蒸馏水稀释至,用蒸馏水稀释至1 000 mL,分装于适宜容器中,分装于适宜容器中,121 高压灭菌高压灭菌15 min 第6页,本讲稿共16页培养基、试剂和样品培养基、试剂和样品无菌生理盐水无菌生理盐水A.3.1 成分成分氯化钠氯化钠 8.5 g蒸馏水蒸馏水 1 000 mLA.3.2 制法制法称取称取8.5氯化钠溶于氯化钠溶于1 000 mL蒸馏水中,蒸馏水中,121 高高压灭菌压灭菌15 min。第7页,本讲稿共16页试验进度表试验进度表 第8页,本讲稿共16页实验步骤实验步骤1.样品的稀释样品的稀释固体和半固体样品:称取固体
5、和半固体样品:称取25 g 样品置盛有样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,均质杯内,8000 r/min10000 r/min 均质均质1 min2 min,或放入盛有,或放入盛有225 mL 稀稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1 min2 min,制成,制成1:10 的样品匀液。的样品匀液。液体样品:以无菌吸管吸取液体样品:以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成的无菌
6、锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成1:10 的的样品匀液。样品匀液。用用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液样品匀液1 mL,沿管壁缓慢注于盛有,沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用摇试管或换用1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成支无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成1:100 的样品匀液。的样品匀液。按上面程序,制备按上面程序,制备10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次,换用倍系列稀释样品匀液。每递增稀释
7、一次,换用1 次次1 mL 无菌吸管或吸头。无菌吸管或吸头。第9页,本讲稿共16页实验步骤实验步骤2.平板接种与培养平板接种与培养 根据对样品污染状况的估计,选择根据对样品污染状况的估计,选择2 个个3 个适宜稀释度个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),在进行的样品匀液(液体样品可包括原液),在进行10 倍递增稀倍递增稀释时,吸取释时,吸取1 mL 样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。同时,分别吸取两个平皿。同时,分别吸取1 mL 空白稀释液加入两个无空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。菌平皿内作空白对照。及时将及时将15 mL20 mL
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- 关 键 词:
- 食品 菌落 总数 测定
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