葛根素对两肾一夹高血压大鼠左心室Apelin/APJ基因表达的影响_大鼠心脏取材取左心室和心尖.docx
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1、葛根素对两肾一夹高血压大鼠左心室基因表达的影响_大鼠心脏取材取左心室和心尖 摘 要:目的:探讨葛根素对两肾一夹(2K1C)高血压大鼠左心室Apelin/Apj基因表达的影响。方法:清洁级雄性SD大鼠30只,随机均分为正常组、模型组和葛根素组。分别测定平均颈动脉压(mCAP)、左室舒张末期压(LVEDP)以及左心室压力改变最大速率(LVdp/dtmax),左心重与体重比值(LVMBW)来评价高血压模型。RT-PCR方法检测左心室组织apelin、APJ基因表达的改变。结果: 与正常组相比,模型组大鼠mCAP、LVEDP以及LVM/BW分别上升36.58(P 左室肥厚(LVH)是与死亡、心血管事务
2、相关的独立危急因素1,是典型的高血压心脏表现,其中血管活性物质起到重要的作用。Apelin是新近发觉的小分子活性多肽2,与Ang具有同源性,属于RAS体系的新成员3。Apelin对正常与病变心脏都具有正性肌力、舒张血管、降低血压的心血管爱护作用4,其受体为G蛋白偶联受体(血管惊慌素受体AT-1相关的受体蛋白,APJ)。Apelin及其受体APJ的mRNA及蛋白广泛存在于哺乳动物与人的多种组织(脑、肺、心脏、血管等)中5。葛根素( puerarin) 是单体-异黄酮化合物,已广泛应用于心脑血管及肺等疾病的治疗。笔者从前的探讨发觉葛根素有逆转肾性高血压大鼠左室肥厚的作用,但机制尚未完全明白。本探讨
3、在两肾一夹肾性高血压大鼠模型上,视察葛根素对Apelin及其受体APJ的影响,旨在进一步探讨葛根素对高血压左室肥厚的影响及其机制,为拓展其临床新用途供应试验依据与理论基础。 1材料与方法 1.1 材料健康雄性SD大鼠30只,体重150180g,由上海斯莱克试验动物有限责任公司供应;葛根素注射液由浙江康恩贝制药股份有限公司供应,批号060103;Trizol购自GIBCO BRL.(USA);dNTP购自Clontech CO(USA),M-MuLV逆转录酶、Taq酶、RNAsin和Oligo(dT)15 Primer为上海晶美生物技术有限公司。余为市售分析纯产品。4个PCR引物由赛百盛公司合成
4、(见表1)。 1.2 两肾一夹高血压模型的复制6及处理30只雄性SD大鼠随机均分为正常组(C)、模型组(M)和葛根素组(P)。后两组大鼠,术前禁食过夜,自由饮水,用戊巴比妥钠(35mg•kg-1,腹腔注射)麻醉,上腹部正中切口,沿腹白线逐层分别,暴露肾脏及肾动静脉,玻璃分针分别动静脉,用银夹将肾动脉套住,并打结固定,术后正常进食与喂水。 饲养8周后,C组和M组大鼠每天腹腔注射生理盐水(80mg•kg-1),P组注射腹腔注射葛根素注射液(80mg•kg-1)。正常饲养4周后,麻醉,称重,左颈总动脉插管连接8通道生理记录仪(PowerLab系统,澳大利亚)记录平
5、均颈动脉压(mCAP)及、LVEDP及(LVdp/dtmax),并计算LVM与大鼠体重(BW)的重量比,作为左室肥厚的指标。取左心室组织约50mg提取RNA,用于测定Apelin-36 mRNA及APJ mRNA水平。 1.3 左心室总RNA的提取及半定量RT-PCR测定Apelin-36及APJ mRNA水平用Trizol一步法提取总RNA。M-MuLV逆转录酶及Oligo(dT)15 primer逆转录成单链cDNA。测定Apelin-36 mRNA以及-actin含量的PCR反应总体积为25L:cDNA 2L,上下游引物共1L,Taq DNA聚合酶混合物12L,DEPC水10L;反应条件
6、:Apelin:955min;9430s,6130s,7240s,热循环36次;72 5min。-actin:9430s,5530s,7240s,热循环24 次;725min。PCR产物经琼脂糖电泳,凝胶成像及定量扫描仪分析,分别获得190bp和291bp的条带。Apelin-36 mRNA与-actin mRNA的比值即为Apelin-36 mRNA的相对含量。重复3次独立试验。APJ mRNA含量的测定与Apelin36 mRNA含量的测定相像,PCR反应条件见表1。 1.4 统计学处理方法结果以s表示,利用SPSS11.0统计学软件进行单因素方差分析,Pmax则降低85.35(Pmax差
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