无菌检查操作规程2015-(1).docx
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1、无菌检查操作规程1. 目的建立无菌检查标准操作规程,确保检查结果准确、可靠。2. 使用范围本公司无菌产品的无菌检查3. 职责质量部QC4. 依据2021 版?中国药典?通那么1101GB/T 19973.2-2005ISO11737-2:1998 ?疗器械的灭菌 微生物学方法 第 2局部:确认灭菌过程的无菌试验? ?医用输液、输血、注射器具检验方法 第 2局部:生物学试验方法?5. 内容5.1. 无菌检查环境保障5.1.1. 无菌检査的所有操作均需在严格控制微生物污染的环境下进展,即无菌检査应在环境干净度10000级下的局部干净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进展。5.1.2. 操作环
2、境的无菌保障程度将直接影响无菌检查结果,为了保证无菌检查用干净室区环境的稳定性,确保检查结果的可靠性,对干净室区的环境定期监测并采取合理的措施保证干净环境符合要求。5.1.3. 无菌检查全过程必须严格遵守无菌操作,防止微生物污染。5.1.4. 干净区的温度、湿度等参数必须符合相应干净级别的要求。5.1.5. 无菌检查操作还需要对检查环境进展监控,5.2. 培养基、稀释液、缓冲液5.2.1. 硫乙醇酸盐流体培养基,市售培养基干粉。除另有规定,接种后应置3035培养。5.2.2. 胰酪大豆胨液体培养基,市售培养基干粉。接种后应置2035培养。5.2.3. 中和或灭活用培养基,按上述硫乙醇酸盐流体培
3、养基或胰酪大豆胨液体培养基的处方及制法,在培养基灭菌或使用前参加适宜的中和剂、灭活剂或外表活性剂,其用量同方法适用性试验。5.2.4. 胰酪大豆胨琼脂培养基,市售培养基干粉。5.2.5. 沙氏葡萄糖液体培养基,市售培养基干粉。5.2.6. 沙式葡萄糖琼脂培养基,市售培养基干粉。5.2.7. 氯化钠蛋白胨缓冲液,市售培养基干粉。5.2.8. 0.9%无菌氯化钠溶液。5.2.9. 培养基使用性检查 无菌检査用的硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基等应符培养基的无菌性检査及灵敏度检査的要求。本检查可在供试品的无菌检査或与供试品的无菌检査同时进展。5.2.9.1. 无菌性检查:每批培养基随机取5
4、支瓶,按各培养基规定的温度下培养14天,应无菌生长。5.2.9.2. 灵敏度检查5.2.9.2.1. 菌种:培养基灵敏度检查所用的菌株传代数不得超过5代(从菌种存中心获得的干菌种第0代,并采用适宜的菌种保藏技术进展保存,以证试验菌株的生物学特性 。 金黄色葡萄球菌CMCC(B)26 003 铜绿假单胞菌CMCC(B)10 104 枯草芽孢杆菌CMCC(B)63 501 生孢梭菌CMCC(B)64 941 白色念珠菌CMCC(F)98 001 黑曲霉CMCC(F)98 0035.2.9.2.2. 菌液制备:接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂
5、培养基上,接种生孢梭菌的培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中,3035培养1824小时;接种白色念珠菌的培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上,2025培养2448小时,上述培养后的新鲜培养物用无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌化钠溶液制成每lml菌数小于100cfu(菌落形成的菌悬液。接种黑曲霉的培养物至沙氏葡萄糖琼脂面培养基上,2025培养57天,加人35 ml 0.05%(ml/ml) 聚山梨酯80的无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱。然后,采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内,用0.05% (ml/ml)聚山梨醋80的无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9
6、%无菌氯化钠溶液制成每lml孢子数量小于100cfu的孢子悬液。菌悬液假设在室温下放置,应在2小时内使用;假设保存在28 在24h 内使用。黑曲霉孢子悬液存在28,在验证过的贮存期内用。5.2.9.2.3. 培养基接种:取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基7支,分别接种小于100cfu的色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各2支,另1支不接种作为空白对照,培养3天;取每管装量为9ml的胰酪大豆胨液体培养基7支,分别接种小于100cfu的草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支,另1支不接种作为空白对照,培养5天。逐日观察结。5.2.9.2.4. 结果判定:空白管应无菌生长,加菌的管生长良好,说
7、明该培养基灵敏度符合规定。5.3. 方法试用性试验进展产品无菌检查时,应进展方法适用性试验,以确认所采用的方法适合于产品的无菌检查。假设检验程序或产品发生化可能影响检验结果时,应重新进展方法适用性试验。方法适用性试验按“供试品的无菌检查的规定及以下要求进展操作。对每一试验菌应逐一进展方法。5.3.1. 菌种及菌液的制备:大肠埃希菌CMCC(B)44 102外,金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉的菌株及菌液制同“培养基灵敏度检查。大肠埃希菌的菌液制同金黄色葡萄球菌。5.3.2. 薄膜过滤法:每种培养基规定接种的供试品总量按薄膜过滤法过滤,冲洗,在最后一次的冲洗液中参加小于
8、100cfu试验菌,过滤。加硫乙醇酸盐流体培养基或胰酪大豆胨液体培养基至滤筒内。另取一装有同体积培养基的容器,参加等量试验菌,作为对照。置规定温度下培养,培养时间不得超过5天,各试验菌同法作。5.3.3. 直接接种法:取符直接接种法培养基用量要求的硫乙醇酸盐流体培养基6管,分别接入小于100cfu的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、生孢梭菌各2管,取符直接接种法培养基用量要求的胰酪大豆胨液体培养基6管,分别接入小于100cfu的枯草芽孢杆菌 、白色念珠菌、黑曲霉各2管。其中1管接入每支培养基规定的供试品接种量,另1管作对照,置规定的温度培养,培养时间不得超过5天。5.3.4. 结果判断:与对照管比拟
9、,如供试品各容器中的试验菌均生长良好,那么说明供试品的检验量在检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计,照此检査方法和检查条件进展供试品的无菌检查。如供试品的任一容器中的试验菌生长微弱、缓慢或不生长,那么说明供试品的检验量在检验条件下有抑菌作用,应采用增加冲洗量、增加培养基的用量、用中和剂或灭活剂、更换滤膜品种等方法,消除供试品的抑菌作用,并重新进展方法适用性试验。 方法适用性试验与供试品的无菌检查同时进展。5.4. 供试品无菌检查无菌检査法括薄膜过滤法和直接接种法。只要供试品性质允许,应采用薄膜过滤法。供试品无菌检查所采用的检查方法和检验条件应与方法适用性试验确认的方法一样。无菌试验过程
10、中,假设需用面活性剂、灭活剂、中和剂等试剂,应证明其有效性,且对微生物无毒性。5.4.1. 检验数量:除另有规定外,按表1规定。5.4.2. 检验量:即接种量,除另有规定外,按表2规定。5.4.3. 阳性对照:应根据供试品特性选择阳性对照菌:无抑菌作用及抗革兰氏阳性菌为主的供试品,以金色葡萄球菌为对照菌;抗革兰氏阴性菌为主的供试品,以大肠埃希菌为对照菌;抗厌氧菌的供试品,以生孢梭菌为对照菌;抗真菌的供试品,以白色珠菌为对照菌。阳性对照试验的菌液制同“,加菌量小于100cfu,供试品用量同供试品无菌检查时每份培养基接种的样品量。阳性对照管培养72小时内应生长良好。5.4.4. 阴性对照:供试品无
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