食品微生物学优秀PPT.ppt
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1、食品微生物学培训食品微生物学培训主要内容主要内容l微生物试验室的技术性管理微生物试验室的技术性管理l2010新微生物标准变动新微生物标准变动微生物试验室技术性管理微生物试验室技术性管理l试验室环境试验室环境l试验室设备试验室设备l培育基与试剂培育基与试剂l标准菌株标准菌株l试验室平安试验室平安试验室环境试验室环境l总原则:环境不影响检测结果精确性l试验室面积与工作量匹配l试验室区域与办公区域分开l单方向工作流程,避开交叉污染l卫生指标项目:干净工作台和干净室l致病菌分别鉴定:生物二级试验室(biosafety level 2 BLS-2)试验室设备试验室设备l设备配置与检测量和检测类型相适应(
2、例如:粪大肠菌群44.50.2)l检测设备放置在适宜条件下(显微镜),便于维护、清洁、消毒与校准,并保持整齐与良好的工作状态l定期进行检查和检定(加贴标识)、维护保养,应有日常监控和运用记录高压灭菌器高压灭菌器l每次灭菌时,放置的物品不宜过于拥挤,物品之间应留用确定空间;最好运用不同的高压灭菌器消毒培育基和试验后废弃物l每次灭菌时,应对灭菌效果进行监控并记录:l每次运用应记录灭菌温度刚好间;l每周检查清洁排气滤网、密封阀等;l清洁内部,去除水的沉淀物或培育基,运用去离子水;l操作前接受特地培训l每年进行一次检定;定期对灭菌效果进行验证:l化学指示胶带;l生物指示剂:湿热脂肪杆菌均质器均质器l每
3、次运用后进行清理,保洁;l每次运用时留意保持均质袋的密封l确保运用无菌的均质袋,定期对无菌袋进行无菌检查冰箱和冰柜冰箱和冰柜l对于存放样品和标准菌株的冰箱和冰柜,每天进行温度核查并记录l分区存放l每半年至少进行一次冰箱和冰柜除霜、清洁和消毒培育基与试剂培育基与试剂l可参照GB/T4789.28规定执行l编制关键培育基和试剂质量限制程序:l明确那些培育基和试剂是关键试剂,应进行技术性验收(选择性固体培育基、血平板、诊断学清、抗生素、生化鉴定管)l规定验收的方法(标准菌株划线接种,菌落特征;标准菌株进行玻片凝集试验;抑菌试验;标准菌株接种生化管视察反应现象)l规定判定标准l以上技术性验收试验需编制
4、相应记录表格进行记录(每批进行);l例:培育基质量限制程序举例(商业培育基与自制培育基)菌株菌株 编制菌株管理程序:购置要求验证和评估试验方法活化、传代方法,同时确认(生化鉴定),有相应记录保存方法、条件并记录工作菌株运用前确认,传代不超过5代。运用记录销毁记录(方法,时间,人员签字)标识要求:名称、来源、标准号、接种日期、所传代数编制标准(参照菌株一览表)参考GB/T27045-2008附录A菌株保存方法菌株保存方法l方法1:甘油冻存法l 置细胞冻存管中,加入终浓度为1520%的灭菌甘油,混匀,-80保存或冻干l方法2:-60-85玻璃珠保存法l 该方法可以对菌株连续保存,特别好用,但与冻干
5、保存比较,该方法在资金和能源上的消耗较大。l 菌株保存方法菌株保存方法l运用不同颜色的玻璃珠有助于菌株的辨别。运用时只需取出一粒玻璃珠,放入含有所需培育基的试管或培育瓶中培育。在常规的液体培育基(一般需氧菌为养分肉汤,厌氧菌为强化梭状芽孢杆菌培育基(RCM),嗜盐菌为加盐养分肉汤培育基)中混入15的甘油得到须要的悬液培育基。l整套保存系统在市场上有售(如ProLab Diagnostics公司的Microbank系统)。试验室平安试验室平安1.废弃物处置2.编写废弃物处理指导书,对运用过的培育基分类进行处理,包括液体培育基、固体培育基、增菌培育基等3.意外状况的处理(包括感染性物质溢洒、擦伤等
6、)4.编写微生物试验室应急处理规范,放于试验室内的醒目处2010微生物标准微生物标准(剩余样品或同批样品不进行微生物复检剩余样品或同批样品不进行微生物复检)l菌落总数(GB 4789.2-2010)l大肠菌群(GB 4789.3-2010)l沙门氏菌(GB 4789.4-2010)l金黄色葡萄球菌(GB 4789.10-2010)l乳酸菌(GB 4789.35-2010)菌落总数主要区分:修改了英文名称修改了菌落总数计算公式中的说明修改了培育基和试剂(删除了NaOH和HCl)删除了其次法 测试片法2010lFood microbiological examination:Aerobic pla
7、te count(食品微生物学检验)2008lMicrobiological examination of food hygiene:Aerobic plate count(食品卫生微生物学检验)检样25g(或25mL)样品+225mL稀释液,均质10倍系列稀释选择23个适宜连续稀释度的样品均质液,各取1mL分别加入无菌培育皿内培育计数各平板菌落数361 计算菌落总数报告48h2h(水产特殊)大肠菌群大肠菌群主要区分:修改了英文名称(同上)其次法:平板计数法菌落选择范围改为15-150CFU删除了第三法 测试片法其次法其次法:平板计数法:平板计数法 检样25g(或25mL)样品+225mL稀释
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