HPLC中常用的检测器.ppt
![资源得分’ title=](/images/score_1.gif)
![资源得分’ title=](/images/score_1.gif)
![资源得分’ title=](/images/score_1.gif)
![资源得分’ title=](/images/score_1.gif)
![资源得分’ title=](/images/score_05.gif)
《HPLC中常用的检测器.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《HPLC中常用的检测器.ppt(46页珍藏版)》请在得力文库 - 分享文档赚钱的网站上搜索。
1、一一:目前目前HPLC中常用的检测器中常用的检测器检测器是一套分离分析设备的关键.目前有两种基本类型的检测器:一类是溶质性检测器溶质性检测器,它仅对被分离组分的物理或化学特性被分离组分的物理或化学特性有响应,属于这类检测器的有紫外、荧光、电化学检测器等。另一类是总体检测器总体检测器,它对试样和洗脱液总的物理或化学性质总的物理或化学性质有响应,属于这类检测器的有示差折光,蒸发光散射,电导检测器等。1http:/1:紫外-可见光(UV-VIS)检测器工作原理工作原理:基于Lambert-Beer定律,即被测组分对紫外光或可见光具有吸收,且吸收强度与组分浓度成正比A=lgIo/I=bc其中A为吸光度
2、(消光值),Io为入射光强,I为透射光强,为样品的吸光度(消光系数)b为光程长,c为样品浓度。通用型检测器通用型检测器约有80的分析样品具有紫外吸收,可以使用这种检测器检测。2http:/优点优点:a:灵敏度高灵敏度高,检测下限约为10-6gmlb:线性范围广线性范围广C:对温度和流速不敏感,适于进行梯度洗脱梯度洗脱 3http:/限制限制:a:没有紫外吸收的物质不能检测b:应尽可能选择在检测波长下没有背景吸收的流动相(限制了一些一些截止波长在200300nm之间的良好溶剂的使用)4http:/2:荧光检测器原理原理:物质的分子或原子经光照射后,有些电子被激发至较高的能级,这些电子从高能级跃至
3、低能级时,物质会发出比入射光波长较长的光,这种光称为荧光。荧光检测器就是在样品的激发波长处检测发射光的强弱样品的激发波长处检测发射光的强弱.在样品浓度足够低时,下,荧光强度与如射光强度,量子效率及样品浓度成线形关系。荧光强度:F=I0LC荧光检测器是一种选择性选择性检测器不到20%的物质使用这种检测手段,许多药物如喹诺酮类药物采用这种检测方法.5http:/在垂直的方向上进行检测6http:/优点优点:a:灵敏度非常高灵敏度非常高(灵敏度在目前常用的HPLC检测器中最高),其检出限可达10-9g/ml,(比紫外检测器高23个数量级,适合于痕量分析)b:可以用于梯度洗脱c:对仪器的稳定性(如温度
4、和压力的稳定性)依赖较小 d:选择性好,优于紫外选择性好,优于紫外例子:花生酱提取物中衡量黄曲霉素的荧光检测法例子:花生酱提取物中衡量黄曲霉素的荧光检测法7http:/缺点缺点:a:适用范围有一定的局限性局限性只适用于有荧光基团衍生化之后有荧光基团的化合物b:定量分析时线性范围较窄线性范围较窄它适合于稠环芳烃、氨基酸、胺类、维生素、蛋稠环芳烃、氨基酸、胺类、维生素、蛋 白质白质等荧光物质的测定8http:/3:二极管阵列检测器(diode-arraydetector,DAD)原理:光电二极管阵列(或CCD阵列,硅靶摄像管等)作为检测元件的UV-VIS检测器。它可构成多通道并行工作,同时检测由光
5、栅分光,再入射到阵列式接受器上的全部波长的信号,然后,对二极管阵列快速扫描采集数据,得到的是时间、光强度和波长时间、光强度和波长的三维谱图三维谱图。年ilano等人首先报道这种检测器,它不必停留就可获得“在流”色谱的全部光谱信息,可跟随色谱峰扫描,用来观察色谱柱流出组分的每个瞬间的动态光谱吸收图由于比其他快速扫描检测器具有结构简单,工作可靠,性能好的优点,自一问世,就得到迅速发展9http:/结构:核心是二极管阵列元件,它由一系列光敏二极管蚀刻在硅片上组成一般,每个阵列又个光电二极管组成,他们的光敏范围是nm,每只二极管的分辨率是nm,光电二极管越多,分辨率越高阵列的每一单元有一只光敏二极管和
6、一只与之并联的电容器光电二极管紫外检测器n个单元同时检测,从而使采样时间减少到普通的使用个二极管的阵列元件,最快时,每ms可完成一次测量每秒中可以收集个数据10http:/11http:/与普通UV-VIS检测器不同之处:a:普通UV-VIS检测器是先用单色器分光,只让特定波长的光进入流动池。而二极管阵列UV-VIS检测器是先让所有波长的光都通过流动池,然后通过一系列分光技术,使所有波长的光在接受器上被检测.b:普通UV-VIS检测器只能得到二维的谱图,而DAD可以得到三维图谱.12http:/13http:/应用a:色谱峰纯度检查色谱峰纯度检查比较光谱法比较光谱法吸收比法吸收比法双波长法双波
7、长法b:色谱峰鉴定色谱峰鉴定 与标准品或标准光谱比较与标准品或标准光谱比较 正常紫外光谱的比较正常紫外光谱的比较三维色谱能提供更多全面的信息。三维色谱能提供更多全面的信息。14http:/4:电化学检测器理论基础理论基础 a:法拉第第一定律法拉第第一定律 在电介过程中,电极上起反应的物质量(W)与通过电介池的电量(Q)成正比。b:法拉第第二定律法拉第第二定律 各种不同的电介质溶液中,通过相同的电量时,电极上析出的电极产物的当量数相同。(96487库仑)15http:/优点优点:a:专用型专用型检测器,具很强的专属性。具很强的专属性。b:线性范围可达线性范围可达106,宽广,宽广 c:高灵敏度高
8、灵敏度 10-12g/l,可与荧光相比,可与荧光相比,16http:/缺点缺点:a:只能测定具有电解活性具有电解活性(电氧化一还原性)物质b:要求洗脱液具有导电性洗脱液具有导电性(可向洗脱液中加入少量电解质,或在柱后补加适量电解质溶液,这并不影响分离效率)现在在药物分析领域里面已经没有其他方法常用了.17http:/5:示差折光检测器(RID)原理原理:化合物的折光率不同,光会偏转。光偏转的程度与样品的浓度成正比。根据不同浓度的物质具有不同折射率来进行组分检测的。溶液的折射率是溶剂(流动相)和溶质(样品)各自的折射率乘以各自的摩尔浓度之和溶有样品的流动相与流动相本身之间折射率之差就表示样品在流
9、动相中的浓度原则上,凡是与流动相折射指数有差别的样品都可以测定它的浓度通用型通用型检测器(浓度浓度检测器)检测限可达g/ml18http:/优点优点:通用性强,操作简便19http:/缺点缺点:a:灵敏度低灵敏度低b:过于娇贵-室温的变化会影响基线的稳定性,大的溶剂前沿峰可能会掩盖前期脱洗的色谱峰20http:/注意事项注意事项:a:洗脱液的组成一定要恒定,不能使用梯度洗脱。b:不能使检测池带压工作,在与其它检测器串联使用时应放在最后。c:流速要恒定,泵的流速波动要小于0.5,使用往复泵时要用阻尼装置。d:温度要恒定,恒温控制要达10-4,在使用时预热时间要充足,否则基线漂移十分严重。21ht
10、tp:/6:蒸发光散射检测器(ELSD)原理原理:色谱柱流出液进入雾化器形成微小液滴,与通入的气体(通常是氮气,有时也用空气)混合均匀,经过加热的漂移管,蒸发除去流动相,样品组分形成气溶胶,用强光或激光照射气溶胶,产生光散射,用光电二极管检测散射光。散射光的强度(I)与组分的质量(m)有下述关系关系:I=km或lgI=blgm+lgk其中k和b为与蒸发室(漂移管)温度、雾化气体压力及流动相性质等实验条件有关的常数。22http:/ELSD最大的优越性最大的优越性在于能检测不含发色团的化合物能检测不含发色团的化合物:如:碳水化合物、脂类、聚合物、未衍生脂肪酸和氨基酸、表面活性剂、药物,并在没有标
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- HPLC 常用 检测器
![提示](https://www.deliwenku.com/images/bang_tan.gif)
限制150内