细胞转染技术优秀PPT.ppt
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1、细胞转染技术一一:转染的简介:转染的简介二二:转染的分类:转染的分类三:三:转染的方法转染的方法一一、转染的简介转染的简介1.1.基因转染基因转染:将具生物功能的核酸转移或运输到细胞内并将具生物功能的核酸转移或运输到细胞内并使核酸在细胞内维持其生物功能。使核酸在细胞内维持其生物功能。2.2.基因转染技术已广泛应用于基因组功能探讨和基因治基因转染技术已广泛应用于基因组功能探讨和基因治疗探讨。疗探讨。二二 、转染的分类、转染的分类瞬时转染瞬时转染稳定转染稳定转染目的目的快速分析快速分析为获得稳定表达为获得稳定表达外源基因的单细外源基因的单细胞克隆胞克隆 目的目的DNADNA与宿主染与宿主染色体色体
2、未整合未整合整合整合表达持续时间表达持续时间随细胞分裂而稀随细胞分裂而稀释至丢失释至丢失48487272小时小时 随宿主随宿主细细胞本身胞本身基因基因组组一一样样复制,复制,转录转录,翻,翻译译,并,并被被稳稳定定遗传遗传 筛选办法筛选办法抗生素抗性抗生素抗性抗生素抗性抗生素抗性基因转染真核细胞的方法基因转染真核细胞的方法转染方转染方 法法化学化学 转染法转染法物理物理 转染法转染法病毒病毒 感染法感染法DEAE一一葡聚糖法葡聚糖法显微显微注射法注射法逆转录病毒逆转录病毒磷酸钙法磷酸钙法电穿孔法电穿孔法腺病毒腺病毒人工人工脂质体法脂质体法基因枪法基因枪法 是最早应用哺乳动物细胞转染的试剂之一。
3、DEAE-葡聚糖是阳离子多聚体,它与带负电的核酸结合后接近细胞膜而被摄取。DEAE一葡聚糖转染已成功地应用于瞬时起先,但用于稳定转染却不行靠。DEAE-DEAE-葡聚糖法葡聚糖法磷酸钙共沉淀转染法磷酸钙共沉淀转染法 由由于于试试剂剂易易得得、价价格格便便宜宜而而被被广广泛泛用用于于瞬瞬时时转转染染和和稳稳定定染染的的探探讨讨。方方法法是是,先先将将DNADNA和和氯氯化化钙钙混混合合,然然后后加加人人到到PBSPBS中中渐渐渐渐形形成成DNADNA磷磷酸酸钙钙沉沉淀淀,后后把把含含有有沉沉淀淀的的混混悬悬液液加加到到培培育育的的细胞上,通过胞膜的内吞作用摄人细胞上,通过胞膜的内吞作用摄人DNA
4、DNA。脂质体介导法(目前应用最广泛)脂质体介导法(目前应用最广泛)原理:阳离子脂质体试剂与原理:阳离子脂质体试剂与DNADNA混合后,形成一种稳定的混合后,形成一种稳定的脂质双层复合物,脂质双层复合物,DNADNA被包在脂质体中间,这种脂质双被包在脂质体中间,这种脂质双层复合物可干脆加到培育的细胞中,脂质体粘附到细层复合物可干脆加到培育的细胞中,脂质体粘附到细胞表面并与细胞膜融合,胞表面并与细胞膜融合,DNADNA被释放到胞浆中。被释放到胞浆中。n此图所示是脂质体介导转染的示意图,它显示了外源质粒此图所示是脂质体介导转染的示意图,它显示了外源质粒进入细胞的一般过程。进入细胞的一般过程。【主要
5、应用】【主要应用】:瞬时转染瞬时转染 稳定转染稳定转染.【特点】:运用方法简洁,可携带大片段【特点】:运用方法简洁,可携带大片段DNA,通用于,通用于各种类型的袒露各种类型的袒露DNA或或RNA,能转染各种类型的细胞,能转染各种类型的细胞,没有免疫原性。虽在体外基因转染中有很高的效率,没有免疫原性。虽在体外基因转染中有很高的效率,但在体内,能被血清清除,并在肺组织内累积,诱发但在体内,能被血清清除,并在肺组织内累积,诱发猛烈的抗炎反应,导致高水平的毒性,很大程度上应猛烈的抗炎反应,导致高水平的毒性,很大程度上应用受限制。用受限制。利用脂质体转染法最重要的就是防止其毒性,因利用脂质体转染法最重要
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