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1、ABO 血型鉴定作业指导书:abo 血型鉴定结果标题:ABO 血型鉴定作业指导书版本号:A 修订号:0 文编号:JAZYY-LJ-SOP-018 公布日期:20xx 年 06 月 06 日 生效日期:20xx 年 07 月 01 日 公布部门:治理层 编制人:* 审核人:* 批准人签字: 页码:第1 页 , 共 5 页 ABO 血型鉴定(玻片法)标准操作程序1 检验目的 鉴定ABO 血型,不仅对某种具体疾病的诊断与治疗如母婴 ABO 血型不合引起的生儿溶血病,还能对输血、器官移植具有重要意义(受者与供者ABO 血型必需完全符合后才能输血或移植)2 检测原理 红细胞血型抗原与相应抗体特异结合,可
2、发生凝集反响。通过正、反定型试验来确定 ABO 血型。正定型是用抗 A 和抗 B 分型血清来测定红细胞上有无相应的 A 抗原和或B 抗原;反定型是用 A 抗原和 B 抗原红细胞来测定血清中有无相应的抗 A和或抗 B 抗体。3 性能参数 红细胞血型鉴定是一个定性试验,目前还没有测定性能指标。第 1 页 共 8 页4 标本 4.1 抽取患者静脉血标本 3mL 置于紫色瓶盖的真空试管内内含 EDTA-K2 抗凝剂。4.2 采血后应马上送到临检科血型室。4.3 样品收到后马上分别血浆以备反定使用,不能准时鉴定的血液标本应存 28冰箱保存。4.4 严峻溶血或脂血的标本不能测定。5 设备和试剂 5.1 血
3、型定型试剂:标准抗血清、标准血球长春生物制品争论所。5.2血型定型试剂应存放在 28冰箱保存。5.3 标准血球使用前必需颠倒彻底混匀,超过失效期的全部试剂不能使用。5.4 清洁的一次性塑料试管配患者 5%红细胞盐水悬液,分别患者血浆标本使用。6 容器和添加剂 采集血样使用一次性含 EDTA-K2 抗凝剂的真空试管(紫色盖)。7 试剂鉴定步骤 每一批试剂必需做效价、亲和力及特异性测定。7.1 标准血清效价滴定 7.1.1 取清洁枯燥的一次性塑料试管,分别标明 A、B,每排标明稀释倍数 2、4.264,最终一管为比照管。7.1.2 每管各加生理盐水 0.2mL。7.1.3 第一排第一管加标准抗 B
4、 血清 0.2mL,其次排第一管加标准抗 A 血清 0.2mL。7.1.4 分别用吸管将第一管内的溶液吸放 3 次,使之混均, 吸 0.2mL 至其次管并混均,依次连续稀释至第 8 管,混均后弃去0.2mL,最终一管不加血清,作为盐水比照。7.1.5 分别参加相应的 2%红细胞悬液 0.2mL,既第一排加 B 型红细胞,其次排加 A 型红细胞。7.1.6 将试管架振摇使之混均,置室温一小时,用肉眼观看结果。比照管应无凝集现象。抗 A 效价应不低于 1:128,抗 B 不低于 1:64 为合格。7.2 标准血清亲和力试验 取清洁玻片 1 块,分别标明抗 A、抗 B,各取相应的标准血清 0.5mL
5、,放置标记处,在吸取 10%相应红细胞盐水悬液 0.1mL,置于血清旁,摇动玻片使血清与红细胞混合,同时开头记时,记录开头消灭凝集的时间,3min 时观看凝块的大小,抗血清的亲和力以在 15s 内开头凝集,3min 时,凝块达1mm2 以上者为合格。7.3标准血清特异性测定 7.3.1 任意取 10 名O 型人红细胞,1 名A 型和 B 型红细胞,分别配成 5%红细胞盐水悬液。7.3.2 取清洁一次性的试管 12 支,各加受检标准抗血清 1 滴,第 1第 10 分别加如 O 型红细胞悬液 1 滴,第 11 管参加 A 型红细胞悬液 1 滴第 12 管参加 B 红细胞悬液 1 滴,混匀,置室温1
6、h,观看结果。7.3.3 假设受检血清同 10 个 O 型红细胞和同型红细胞都不凝,只与含相应抗原的红细胞凝集,则其特异性合格。7.4 标准血球特异性、亲和力测定对于标准血球试剂,我们用以鉴定合格的标准血清做其特异性测定,亲和力试验,方法如下:7.4.1 取 4 支清洁的一次试管,各加以鉴定合格的标准血清抗 A,随机取 4 盒到标准血球 A 血球分别参加 4 支试管内,混匀,室温 1h,观看结果。7.4.2 取 4 支清洁的一次性试管,各加以鉴定合格的标准血清抗 B,随机取 4 盒到标准血球 B 血球分别参加 4 支试管内,混匀,室温 1h,观看结果。7.4.3 假设消灭特异性凝集,则其特异性
7、合格。7.4.4 亲和力参照血清方法。8 操作步骤 8.1 5%的红细胞盐水悬液的配制:取患者压积红细胞 1 滴,加 0.8mL 或16 滴盐水将患者血配制成 5%的红细胞悬液 8.2 正定型:取试管 2 支,分别标明抗 A、抗 B,并分别参加标准的抗 A、抗 B 血清各 2 滴,加受检者的 5%红细胞悬液各 2 滴,离心 1000rpm 一分钟,先观看试管中上清液有否溶血,然后轻摇试管,肉眼及显微镜观看是否凝集,按下表报告结果。8.3 反定型:取试管 3 支,分别标明 A、B、O,并分别参加 5% 标准 A、B、O 型红细胞悬液各 2 滴,加受检者的血清每管 2 滴, 离心 1000rpm
8、一分钟,先观看试管中上清液有否溶血,然后轻摇试管,肉眼及显微镜观看是否凝集,按下表报告结果。ABO 血型正反定型结果推断“+”为凝集,“-”为不凝集分型血清+受检者红细胞 受检者血型 受检者血清+标准红细胞 抗-A 血清抗-B 血清 A 型红细胞B 型红细胞 O 型红细胞+-+-+ABOAB-+-+-+- 9 质量掌握措施 对外购标准血清及标准红细胞分别作特异性、效价及亲和力鉴定。10干扰因素 冷凝集:该试验应在常温下进展以防冷凝;脂血; 溶血。11 结果计算及测量不确定度 红细胞血型鉴定无结果计算及测量不确定度。12 生物参考区间 红细胞血型人人都存在,无生物参考区间。13 患者检验结果可报
9、告区间 红细胞血型鉴定患者检验结果可报告区间为 A 型、B 型、AB 型和 O 型。14警告/危急值 红细胞血型鉴定无警告/危急值。15 试验室解释 每个人都有 ABO 血型中的某种抗原及相应的自然抗体。血型检查的重要性不在于某种具体疾病的诊断与治 疗,而在于:15.1 输血:血液是人类赖以生存的重要成分。循环血量缺乏或血细胞的削减大失血或贫血等,均会发生很多临床病症, 甚至危及生命,此时输血是治疗与抢救生命的重要措施。输血前必需检查血型,选择血型一样的供血者,进展穿插配血完全相合才能输血。15.2 母婴ABO 血型不合引起的生儿溶血病,主要是依靠血型血清学检查来诊断。15.3 器官移植时,受
10、者与供者也必需 ABO 血型相符才能移植。血型不符极易引起急性排异反响、导致移植失败。16安全防护措施 血型检验过程中,要穿好工作衣、带防护口罩、手套;严格按操作规程,检验完毕后,要用 0.2%过氧乙酸溶液擦拭试验台、显微镜手柄、载物台等。17变异的潜在来源17.1 生儿、年老体弱者 ABO 血型抗体反响较弱,因而观看结果时,不行用力摇动,以免弱凝集散开而呈阴性结果。17.2 由于颖血清中有补体存在,抗体与相应抗原结合后,可发生溶血,故观看结果时觉察有溶血现象或镜下红细胞有削减趋向,其意义与凝集一样,表现配血不合。17.3 红细胞或血清被细菌或病毒污染后,消灭细菌性凝集。17.4 患者未产生
11、ABO 抗体或抗体抑制这种状况可见于;生儿,46 个月内的婴儿反向定型时可能不凝集或凝集很弱,且生儿抗体多来自母亲,故反定向意义不大;随年龄的增长老年人抗体水平的下降:白血病、淋巴瘤以及使用免疫抑制药物患者;骨髓移植患者等。17.5 17.5被检红细胞特别 弱 A 或弱 B 亚型;白血病时可使 A 或 B 抗原减弱,而误定为 O 型;霍奇金病也有类似白血病的状况;获得性 B 或获得性 A 表现等。17.6 被检者血浆成分特别 某些疾病如多发性骨髓瘤、霍奇金肉瘤时,可使血浆纤维蛋白原水平上升易形成串状物,外观类似凝集;应用血浆扩溶剂如低分子右旋糖酐、胰腺癌等,血浆可有过多的可溶性血型物质,中和了试剂中抗 A 或抗 B。18 报揭露送时间与标本保存18.1 一般鉴定标本,当日下午 4 点发出报告,急诊标本在无特别疑难血型时,接到标本后 40 分钟报告鉴定结果。18.2 血型标本鉴定后标本保存二周。19 参考文献1 叶应妩, 王毓三主编.全国临床检验操作规程. 中华人民共和国卫生部医政司.南京.其次版.1997.2.临床根底检验学全国医学专科学校教材,人民卫生出版社。
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